尿石素A通过活化miR-136介导的Sirt1信号通路减轻呼吸道合胞病毒诱导的新生小鼠肺部感染

摘要

目的 探讨尿石素A(UA)治疗呼吸道合胞病毒（RSV）引起的新生小鼠肺部感染的疗效及作用机制。方法 将Babl/c小鼠（5～7 d）随机分为5组（n=10）：正常对照（Control）组、RSV感染（RSV）组、低剂量UA(UA-L)组、中剂量UA(UA-M)组、高剂量UA(UA-H)组。BEAS-2B细胞同样分为Control组、RSV组、UA-L组、UA-M组和UA-H组。除正常对照组外，其余4组小鼠或细胞均给予RSV感染。RSV感染2 h后，UA-L组、UA-M组和UA-H组小鼠分别腹腔注射2.5、5和10 mg/kg的UA,1次/d，连续注射2周；UA-L组、UA-M组和UA-H组细胞分别用2.5、5和10μmol/L的UA处理48 h。HE染色评价肺组织病理学改变。收集支气管肺泡灌洗液用于炎症细胞计数和炎症因子检测。炎症、细胞活力、凋亡和自噬分别采用酶联免疫吸附实验、CCK-8实验、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记实验、流式细胞术、Western blotting和免疫荧光染色检测。qRT-PCR检测miR-136和Sirt1 mRNA的表达，双荧光素酶报告基因系统验证miR-136和Sirt1的相互关系。结果 与Control组相比，RSV感染组小鼠肺组织病理评分、病毒荷载量、TUNEL阳性细胞数、LC3-II/I、Beclin-1和miR-136表达及BALF中总细胞数、炎症细胞数和炎症因子含量显著升高（P<0.0001），而p62和Sirt1表达显著减少（P<0.0001）；与RSV组相比，UA处理则呈剂量依赖性逆转上述检测指标值（P<0.05）。与Control组相比，RSV组BEAS-2B凋亡细胞数、LC3B阳性细胞数及miR-136表达明显增多，Sirt1表达减少（P<0.01）；与RSV组相比，UA处理剂量依赖性地减弱上述指标的改变（P<0.01）。与miR-NC组相比，miR-136组Sirt1-WT的荧光素酶活性显著降低，Sirt1表达减少（P<0.001）,Sirt1-MUT的荧光素酶活性不变（P>0.05）。与RSV+UA组相比，RSV+UA+miR-136组和RSV+UA+Ex527组炎症因子含量和凋亡细胞数明显增加（P<0.05）,LC3B表达显著减少（P<0.0001）;miR-136与Ex527共处理进一步改变上述指标值（P<0.05）。结论 UA通过活化miR-136介导的Sirt1信号通路减轻RSV诱导的新生小鼠肺部感染。

关键词

尿石素A / 呼吸道合胞病毒 / miR-136 / Sirt1