丁酸钠与索拉非尼可能通过YAP诱导铁死亡协同抑制肝癌细胞增殖

摘要

目的 探讨丁酸钠（NaB）联合索拉非尼（Sora）是否协同诱导铁死亡抑制肝癌细胞增殖及其机制。方法 CCK8、平板克隆实验和倒置光学显微镜观察探讨NaB或（和）Sora对HepG2肝癌细胞增殖活性的影响；GSH法和C11-BODIPY 581/591检测NaB或（和）Sora是否诱导HepG2细胞发生铁死亡；公共数据库TCGA分析肝癌组织与正常组织中YAP基因表达差异；Western blotting检测NaB或（和）Sora对HepG2细胞中YAP蛋白表达及其磷酸化水平的影响。结果 CCK8结果显示，2 mmol/L NaB联合Sora可显著降低HepG2肝癌细胞对Sora的IC₅₀（P<0.001），联合指数法证实Sora与NaB联合具有协同作用（CI<1），铁死亡抑制剂（Fer-1）和YAP激活剂（XMU）则可逆转NaB联合Sora对HepG2细胞的增殖抑制作用（P<0.001、P<0.001）；平板克隆实验结果显示，相较NaB或Sora单独处理，NaB联合Sora可显著抑制HepG2细胞克隆球形成（P<0.01,P<0.01）；形态学观察结果显示，NaB或Sora单独处理均可使HepG2细胞分散，形态皱缩且数量减少，而两者联合处理可加剧这一现象；GSH法和C11-BODIPY581/591检测结果显示，较NaB或Sora单独处理，NaB联合Sora可进一步降低细胞内GSH水平（P<0.001,P<0.05）和脂质ROS水平（P<0.05,P<0.01）,Fer-1和XMU可逆转NaB联合Sora对HepG2细胞内GSH水平的下调作用（P<0.001,P<0.01）和脂质ROS水平的上调作用（P<0.01,P<0.05）;TCGA分析结果显示，肝癌组织与正常组织相比YAP mRNA高表达（P<0.001）;Western blotting结果显示，较NaB或Sora单独处理，NaB联合Sora进一步下调HepG2细胞YAP蛋白表达水平（P<0.05,P<0.05），上调YAP蛋白磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论 NaB联合Sora可能通过抑制YAP诱导铁死亡，进而协同抑制肝癌细胞增殖。

关键词

丁酸钠 / 索拉非尼 / 肝癌 / 铁死亡 / YAP / 细胞增殖