miR-224-5p调控PI3K/Akt/FoxO1轴抑制氧化应激减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

摘要

目的 探究miRNA-224-5p在缺氧/复氧（H/R）诱导心肌细胞损伤中的作用机制。方法 收集160例急性心肌梗死（AMI）患者和80例健康体检者（HC）的血浆检测miRNA-224-5p及生化指标。H9c2细胞分为对照组（Control）、H/R组、H/R+miR-224-5pNC组、H/R+miR-224-5p mimics组。噻唑蓝（MTT）检测细胞活力；试剂盒检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶2(SOD2)和乳酸脱氢酶（LDH）；双荧光素酶报告基因实验验证miR-224-5p与PTEN的靶向关系；生物信息学方法对靶基因的潜在机制进行分析；qRT-PCR检测miRNA-224-5p mRNA表达；Western blotting检测PTEN、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、SOD2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Ak及p-FoxO1/FoxO1蛋白水平；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与HC组相比，AMI组的血糖、 C反应蛋白、CK、CK-MB和cTnI水平均显著高于对照组（P<0.05）。AMI组和H/R组miR-224-5p的表达低于对照组（P<0.05）；心肌细胞活力呈缺氧/复氧时间依赖性减少；PTEN是miR-224-5p的靶基因；PI3K/Akt通路是最显著富集的通路；与Control组相比，H/R组SOD2的活性降低，LDH的活性和MDA的含量均上升，细胞凋亡率上升（P<0.05），细胞中p-PI3K、p-Akt、p-FoxO1、SOD2和Bcl-2蛋白表达水平均降低，PTEN、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达均升高（P<0.05）；与H/R组比较，H/R+miR-224-5p mimics组SOD2的活性显著上升，LDH、MDA的水平和细胞凋亡率均显著降低（P<0.05），细胞中p-PI3K、p-Akt、p-FoxO1、SOD2和Bcl-2的表达均上调，PTEN、Bax和Cleaved caspase3蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论 miR-224-5p过表达通过PI3K/Akt/FoxO1轴上调抗氧化基因SOD2的表达，缓解H/R诱导的H9c2细胞的氧化应激，减少细胞凋亡。

关键词

缺氧/复氧 / 微小RNA / 氧化应激 / 凋亡