5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮抑制流感病毒诱导A549细胞炎症反应和铁死亡的作用及机制

摘要

目的 研究四方蒿中提取出的5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮（5-HDF）对H1N1流感病毒引起的肺损伤的保护作用及潜在机制。方法 使用H1N1流感病毒感染A549细胞制作流感病毒感染模型，检测5-HDF的细胞毒性及其对感染病毒后的炎症和铁死亡相关指标及相关信号通路蛋白的影响。采用乙醇回流提取和硅胶色谱法从四方蒿中提取分离获得5-HDF，并采用NMR和MS鉴定其结构。采用MTT法检测不同浓度的5-HDF对A549细胞的毒性；H1N1流感病毒以0.1的感染复数感染A549细胞；采用流式细胞术检测5-HDF对感染H1N1流感病毒后A549细胞中TRAIL和IL-8表达水平的影响；Western blotting检测phospho-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)、phospho-NF-κB p65(Ser536)、cleaved caspase3、cleaved PARP、SLC7A11、GPX4等炎症、细胞凋亡和铁死亡相关蛋白表达的水平。通过鼻腔接种50μL半数致死量（LD50）的H1N1流感病毒液复制小鼠H1N1流感病毒感染模型，以体质量变化率、肺解剖结果、肺组织病理形态变化为指标，考察5-HDF(30 mg/kg、60 mg/kg)体内抗H1N1流感病毒的作用。结果 MTT结果显示5-HDF在0～200μg/mL对A549细胞没有明显的细胞毒性（P>0.05）。流式细胞术和Western blotting结果显示，5-HDF能抑制H1N1流感病毒感染的A549细胞中phospho-NF-κB p65和phospho-p38 MAPK的活化，降低促炎因子IL-8的表达，且5-HDF能上调SLC7A11和GPX4等抗铁死亡相关蛋白表达的水平，并抑制凋亡标志物cleaved caspase3和cleaved PARP及凋亡因子TRAIL的表达（P<0.05）。5-HDF灌胃给药7 d，可提高H1N1流感病毒感染导致的小鼠体质量降低，降低因感染H1N1流感病毒而异常升高的肺指数，并减轻其肺组织病变程度（P<0.05）。结论 本研究推测5-HDF具有一定的抗小鼠H1N1流感病毒感染作用，可能通过增加SLC7A11和GPX4的表达并抑制phospho-NF-κB p65和phospho-p38 MAPK的活化，降低cleaved caspase3和cleaved PARP的表达，来减弱流感病毒H1N1感染A549细胞所引起的铁死亡、炎症反应和细胞凋亡。

关键词

四方蒿 / 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮 / 铁死亡 / 抗炎 / 流感病毒