基于YTHDF2介导凋亡相关因子降解途径研究牙龈卟啉单胞菌协助食管癌免疫逃逸

摘要

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌（Pg）感染食管癌细胞后对YTHDF2及凋亡相关因子（Fas）的影响，阐明其促进免疫逃逸可能的调控机制。方法 运用免疫组织化学法及Western blot法检测Pg感染食管癌与YTHDF2及Fas表达变化；运用免疫共沉淀验证YTHDF2和Fas蛋白间的相互作用；将体外培养的Pg感染后的KYSE150细胞通过慢病毒转染分为对照组（转染si-NC）和实验组（转染si-YTHDF2）,Western blotting检测两组细胞中YTHDF2、组织蛋白酶B(CTSB)及Fas、FasL蛋白的表达水平；对Pg感染的KYSE150细胞用组织蛋白酶抑制剂（E64）进行处理，Western blotting分别检测抑制剂处理前后YTHDF2、CTSB、Fas及FasL蛋白的表达变化情况；Pg感染前后及E64处理的KYSE150细胞与人外周血单个核细胞（PBMC）共培养，运用流式细胞术检测T细胞相关效应分子的表达情况。结果 免疫组化法及Western blotting结果显示，Pg感染后的组织或细胞中YTHDF2的表达增强，而Fas表达减弱（P<0.001）；免疫共沉淀结果显示，YTHDF2和Fas之间可直接相互作用；Western blotting结果显示，si-YTHDF2组细胞中CTSB表达量减低，而Fas及FasL的表达量高于si-NC组（P<0.001）；用E64处理细胞后，CTSB表达减弱，YTHDF2表达无影响，而Fas及FasL的表达增强；流式细胞术结果显示，与PBMC共培养的细胞中，GranzymeB及Ki67表达由强到弱分别为Pg阴性、Pg阳性+E64、Pg阳性，而PD-1表达情况相反（P<0.001）。结论 Pg感染依赖YTHDF2调节Fas的表达，协助食管癌免疫逃逸，从而促进食管癌发生发展，表明YTHDF2可能是一个新的调控食管癌免疫逃逸的关键分子。

关键词

食管鳞状细胞癌 / 牙龈卟啉单胞菌 / m⁶A甲基化阅读蛋白YTHDF2 / 凋亡相关因子 / 肿瘤免疫