槟榔活性成分诱导口腔黏膜下纤维化的机制：基于网络药理学结合临床样本验证

摘要

目的 探究槟榔的成分及其促进口腔黏膜下纤维化的机制。方法 采用Thermo QE plus液相色谱串联高分辨质谱仪和Compound discover 3.2数据处理软件进行槟榔中药化学成分分析，将检测到的化合物以质谱响应值排序，分析排名前20化合物的活性。化合物活性来源根据《中国药典（2015版）》汇总，数据查询基于PubChem、Chemical book以及Scifinder数据库。借助网络药理学方法分析槟榔影响口腔黏膜下纤维化（OSF）的潜在活性成分、核心靶点及主要影响的生物功能、信号通路。通过整合人类基因数据库（Genecards）、基因组百科全书数据库（KEGG）等数据库获取OSF的作用靶点。以OB≥30%为条件，在中药系统药理学技术平台（TCMSP）中筛选出槟榔可作用于靶点的化合物，并构建靶点-化合物、化合物-中药、靶点-化合物-中药网络。运用MOE软件的分子对接技术，分析成分-靶点结合的可能性，再利用Pymol软件进行分子对接可视化。最后通过免疫组化在临床样本中验证槟榔是否影响PI3K-Akt、MAPK两条通路涉及的主要蛋白，初步验证槟榔诱导OSF的潜在作用机制。结果 基于网络药理学和槟榔粗提物中筛选出前10的化合物与OSF核心靶点中核心交集基因，确定了槟榔可能通过调控PI3K-Akt与MAPK通路。通过免疫组化在临床样本中验证，细胞膜上的PI3K蛋白表达量在OSF患者组中表达下降（P=0.0002）,p-PI3K(P=0.0002)表达量上升，进一步激活下游的AKT1蛋白表达增加（P=0.0006），加剧磷酸化蛋白p-AKT蛋白的表达及堆积（P=0.0013）；而在MAPK通路中，OSF患者组对比正常组，通过上调JNK蛋白（P=0.0130），诱导下游AP-1复合蛋白c-jun及c-fos转录因子的活性增加，促使其向细胞核聚集；且OSF患者组较正常组血浆的IL-6(P<0.0001)与IL-8(P=0.0095)含量均上升。结论 槟榔碱、槟榔次碱、异去甲槟榔碱等槟榔中的主要活性成分可能通过刺激PI3K-Akt与MAPK信号通路，促进炎症介质IL-6及IL-8的表达，诱导胶原增生，导致口腔黏膜下纤维化病变。

关键词

槟榔 / 口腔黏膜下纤维化性变 / 网络药理学 / 分子对接