苗药四大血减轻大鼠的类风湿性关节炎：基于下调基质金属蛋白表达

摘要

目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠关节骨、软骨破坏及滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW,40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40、20、10 g/kg）,7只/组。通过皮下注射牛型II胶原来建立CIA大鼠模型，并且通过每天经口灌胃的方式给予治疗，持续3周。采用AI评分分别于造模前，灌胃前1周，灌胃后1周，灌胃2周，灌胃3周观察大鼠后足关节病变情况。HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化，ELISA法检测TNF-α、IL-1β,Real-time PCR检测滑膜组织中NF-κB p65、MMP1、MMP2、MMP9 mRNA表达水平，Western blot检测滑膜组织中NF-κB p65、基质金属蛋白1(MMP1)、MMP2、MMP9蛋白表达水平。网络药理学获取SX外用途径治疗类风湿性关节炎（RA）中的重要靶蛋白，经拓扑分析后筛选出核心靶蛋白。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片，Mod组可见较多软骨细胞坏死，软骨下层骨组织受侵蚀，并有新生毛细血管形成；而GTW组和SX高、中、低剂量组中，软骨及骨损伤均有不同程度地降低，新生血管数量减少，随SX剂量增高，治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比，GTW组和SX高、中、低剂量组滑膜组织TNF-α、IL-1β、NF-κB p65、MMP1、MMP2、MMP9 mRNA和蛋白表达量有不同程度地降低（P<0.05）。经网络药理学分析得到外用SX治疗RA中的核心靶蛋白—MMPs。结论 SX可以改善CIA大鼠关节骨和软骨的破坏、减缓滑膜血管新生，其机制可能为调节MMP基因表达的TNF-α/IL-1β/NF-κB-MMP1、2、9信号转导途径，下调MMPs表达水平，此外可初步推断MMPs在除口服治疗途径以外仍发挥关键作用。

关键词

苗医药方“四大血” / 类风湿性关节炎 / 基质金属蛋白 / 网络药理学 / 关节骨和软骨的破坏

基金资助

国家自然科学基金（82060776）; 2021年省级大学生创新创业计划训练项目[S202110660045]; National Natural Science Foundation of China(82060776)