熊果苷通过抑制巨噬细胞募集并调控Akt/NF-κB和Smad信号通路改善小鼠肝纤维化

摘要

目的 探究熊果苷（Arb）对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的保护作用及其机制。方法 将24只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Arb低剂量给药组（25 mg/kg）和Arb高剂量给药组（50 mg/kg）,6只/组。通过腹腔注射CCl4建立肝纤维化小鼠模型，灌胃给药持续6周后取材。取血清进行生化指标检测，取肝组织进行HE染色、天狼猩红染色和免疫组化染色；q-PCR检测肝组织纤维化相关指标a-SMA,Pdgfb,Col1α1,Timp-1基因以及炎症相关指标Ccl2和Tnf-a基因的mRNA水平；Western blot法检测肝组织α-SMA蛋白表达水平。Transwell迁移实验使用Arb处理THP-1和RAW264.7细胞24 h后，DAPI染色检测迁移细胞数目。体外实验使用Arb处理LX-2细胞24 h,Western blot法检测Akt、p65、Smad3及其磷酸化p-Akt、p-p65、p-Smad3和α-SMA的蛋白水平。结果 与模型组小鼠相比，Arb给药组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平降低（P<0.05），肝组织损伤和胶原沉积减轻（P<0.001），肝脏巨噬细胞浸润程度和α-SMA蛋白表达水平也降低（P<0.001）。Arb降低CCl4诱导的小鼠肝脏a-SMA,Pdgfb,Col1α1,Timp-1,Ccl2和Tnf-a基因的mRNA水平（P<0.05）。Transwell迁移实验显示，Arb可抑制THP-1和RAW264.7细胞的迁移募集作用。体外实验显示，Arb可抑制LX-2细胞Akt、p65和Smad3的磷酸化，并且降低α-SMA的蛋白表达水平。结论 Arb可通过减少巨噬细胞募集和浸润，同时干预Akt/NF-κB和Smad信号通路抑制肝星状细胞活化，从而改善小鼠肝脏炎症及纤维化。

关键词

熊果苷 / 炎症 / 肝纤维化 / 巨噬细胞募集 / 肝星状细胞