束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

摘要

目的 探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法 选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型，将大鼠分为4组：Control组（n=15，每日禁食水6 h）;Stress组（n=15，每日束缚6 h）;Stress+Fasudil组（n=15，每日束缚6 h，束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）；Fasudil组（n=15，每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）。用高架十字迷宫实验（EPM）检测各组大鼠行为学变化，ELISA检测血清CORT和S100B水平，检测脑组织伊文思蓝（EB）的渗漏情况以评估渗透性的改变，免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化，Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况，透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果 与Control组相比，Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为；Stress组和Stress+Fasudil组血清CORT含量均显著高于Control组（P<0.001）；与Control组和Stress+Fasudil组相比，Stress组EB渗漏含量和S100B含量均显著升高（P<0.05）;Stress组紧密连接蛋白的表达显著低于Control组和Stress+Fasudil组（P<0.05）;Pull-down实验和Western blot分析证实，Stress组RhoA-GTP(P<0.001)、ROCK2(P<0.001)、p-MLC2(P<0.05)的表达显著高于Control组和Stress+Fasudil组；脑微血管内皮细胞超微结构显示，Stress组呈现显著的形态学改变。结论 束缚应激能够通过激活Rho/ROCK信号通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤。

关键词

束缚应激 / 血脑屏障 / 杏仁核 / Rho/ROCK通路 / 紧密连接 / 渗透性