高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

摘要

目的 探究UBE2S在肝癌微环境不同细胞类型的特异性表达及对肝癌细胞干性的影响。方法 使用TCGA数据库分析肝癌中UBE2S转录水平及其启动子甲基化水平差异，使用CPTAC数据库分析UBE2S蛋白水平差异。使用TISCH单细胞测序数据挖掘UBE2S在不同细胞类型中的表达，并分析细胞通讯的强度以及细胞群各自的关键转录因子。免疫组化验证UBE2S在肝癌组织中的表达；多色免疫荧光检测UBE2S在肝癌细胞以及T细胞的表达情况。利用shRNA敲低肝癌细胞HCC-LM3中的UBE2S，分为shCtrl（对照组）、shUBE2S-1（敲低组1）、shUBE2S-2（敲低组2）3个组，利用克隆形成实验、悬浮成球实验检测UBE2S敲低对HCC-LM3干性影响。结果 UBE2S在TCGA数据库中非配对肿瘤组织中高表达（P<0.001），配对肿瘤组织中也高表达（P<0.001），随着肿瘤分级增高，转录水平逐渐增高（P<0.001）；在CPTAC数据库中肝癌组织UBE2S蛋白水平表达也增高（P<0.001）；肝癌中UBE2S启动子甲基化水平降低（P<0.001）;TP53突变组UBE2S转录水平更高（P<0.001）。单细胞测序结果显示，UBE2S在T细胞等细胞群高表达；内皮与上皮及成纤维细胞之间的细胞交互强度较高，SMAD1等转录因子可能是Tprolif细胞关键转录因子。与正常组织相比，UBE2S在肝癌组织高表达；且在肝癌细胞和T细胞中均有较高表达。克隆形成实验显示：与shCtrl组相比，敲低UBE2S能减少肝癌细胞克隆形成数目（shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.05）；悬浮成球实验显示：与shCtrl组相比，敲低UBE2S能减少肝癌细胞肿瘤球形成数目（shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.01）。结论 UBE2S在肝癌组织T细胞中高表达，与预后不良相关，且其能促进肝癌细胞干细胞特性。

关键词

单细胞测序 / UBE2S / 肝癌 / T细胞

基金资助

国家自然科学基金（81774327）; 广西自然科学基金（2021GXNSFBA196039）; 安徽省自然科学基金（2308085QH245）; 安徽省高校科学研究重大项目（2023AH040261）