BZW1高表达促进胃癌细胞的侵袭和转移：基于调控Wnt//β-catenin通路和促进上皮间质转化

摘要

目的 明确碱性亮氨酸拉链蛋白1(BZW1)在胃癌中的表达情况，并探讨其对胃癌患者预后的影响及其可能的作用机制。方法 分别采用TIMER、UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分析BZW1在胃癌组织中的表达情况，与肿瘤分级、分期之间的相关性及对患者预后的影响。纳入2014年1月～2016年12月在我院行胃癌根治术的102例患者，分析BZW1在胃癌组织中的表达水平、对胃癌疾病进展和患者术后5年生存率的影响。体外采用慢病毒转染的方式构建上调和下调BZW1表达的胃癌细胞系（MGC803），分析BZW1对MGC803细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）的作用。采用KEGG富集分析预测BZW1在胃癌中的可能作用机制，并进一步采用Western blot实验进行体外验证。结果 生物信息学分析结果显示，BZW1在胃癌和癌旁组织中的表达量差异有统计学意义（P<0.01），免疫组化和RT-qPCR结果显示，BZW1在胃癌组织中的蛋白和mRNA表达水平分别是癌旁组织的3.30倍和6.54倍（P<0.01）；胃癌组织中BZW1的表达水平与外周血CEA和CA199水平呈正相关（P<0.01）；单因素结合Cox多元回归模型分析证实BZW1高表达（P<0.05,HR=2.070,95%CI:1.021～4.196）是影响胃癌患者根治术后5年生存率的独立危险因素；以BZW1相对表达量3.61为截点值，预判术后5年死亡的敏感性为75.56%，特异性为71.93%(P<0.01)。Transwell实验显示，上调BZW1可促进MGC803细胞的迁移和侵袭（P<0.05），下调则相反（P<0.05）。Western blot实验发现，上调BZW1可促进MGC803细胞N-cadherin与Vimentin的表达（P<0.05），并抑制E-cadherin的表达（P<0.05），下调则反之（P<0.05）。富集分析显示，BZW1生物功能可能与Wnt//β-catenin信号相关。Western blot实验进一步证实，上调BZW1可促进Wnt3a、β-Catenin及C-myc的表达（P<0.05），而下调则相反（P<0.05）；使用Wnt通路抑制剂XAV-939可显著削弱上调BZW1对MGC803细胞中EMT关键分子的蛋白N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的调控作用（P<0.05）。结论BZW1在胃癌组织中高表达并影响患者预后，可能与调控Wnt/β-catenin信号促进胃癌细胞EMT进程相关。

关键词

胃癌 / 碱性亮氨酸拉链蛋白1 / 预后 / 上皮-间质转化 / Wnt/β-catenin