秋水仙碱通过激活AMPK减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤

摘要

目的 探究秋水仙碱（CCC）对心肌缺血再灌注损伤（I/R）的影响与相关机制。方法 采用缺氧复氧（H/R）的方式在H9C2细胞上模拟缺血再灌注损伤，使用3 nmol/L秋水仙碱对行H/R处理的细胞进行干预；采用手术的方式在雄性C57/BL6小鼠上建立心肌缺血再灌注模型，将32只小鼠随机分为：假手术（SO）组，I/R组、I/R+CCC组和I/R+CCC+Dorsomorphin(DSMP)组，每组8只。使用CCK-8检测细胞活力，使用Western blot检测AMPK及其磷酸化水平、氧化应激指标（NOX4、NRF2、SOD2）和凋亡指标（BAX、Bcl-2、cleaved caspase-3），使用商用试剂盒检测心肌组织ATP含量，使用免疫荧光染色检测心肌组织8-OHdG和cleaved caspase-3阳性率，分离心肌线粒体和胞浆后分别检测线粒体BAX(Mito-BAX)和胞浆细胞色素C(Cyt-Cyto C)，使用心脏超声评估心脏功能，使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液染色评估梗死面积，使用商用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶（LDH）和心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量，为明确AMPK在其中的作用，使用DSMP抑制小鼠体内AMPK活性。结果 体外实验中，H/R可以导致AMPK磷酸化水平、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平和细胞活力显著降低（P<0.05），并提高NOX4、BAX、cleaved caspase-3表达水平（P<0.05）；秋水仙碱处理可以减轻H/R的损伤效应（P<0.05）。体内实验中，与SO组相比，I/R组AMPK磷酸化水平、ATP含量、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平、心脏功能均显著降低（P<0.05）,NOX4、Mito-BAX、Cyt-Cyto C、BAX、cleaved caspase-3表达水平，心肌切片8-OHdG和cleaved caspase-3阳性染色率，心肌梗死面积，血清LDH和cTnT含量显著升高（P<0.05），秋水仙碱治疗可以逆转I/R带来的损伤效应（P<0.05），但DSMP可以抵消秋水仙碱的保护作用（P<0.05）。结论秋水仙碱可以通过激活AMPK减轻氧化应激和凋亡来减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤，保护心功能。

关键词

秋水仙碱 / 心肌缺血再灌注损伤 / AMPK / 氧化应激 / 凋亡

基金资助

国家自然科学基金（82070238）