新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解：基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

摘要

目的 探讨新风胶囊（XFC）对白介素（IL）-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法 构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型；SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验（CCK-8）和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度；双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒（inhibitor）及阴性对照组，转染至软骨细胞中。分为对照组（NC）,IL-1β组，XFC组，IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5p inhibitor,IL-1β+miR-502-5p inhibitor+XFC最佳含药血清组，酶联免疫吸附试验（ELASA）检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验（WB）、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体（ADAMTS5）和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果 与NC组相比，IL-1β组中软骨细胞活力下降，细胞凋亡率升高，且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降，IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高（P<0.05）。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比，XFC含药血清干预后，软骨细胞活力升高，细胞凋亡率下降，IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达下降，miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高（P<0.05）。与NC-inhibitor相比，转染miR-502-5p inhibitor后，IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高，miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降；与miR-502-5p inhibitor相比，将miR-502-5p inhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后，XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论 XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解，减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤，其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

关键词

miR-502-5p / 骨关节炎 / 新风胶囊 / 炎症 / 细胞外基质

基金资助

国家自然科学基金（82274490）; 安徽省高等学校科学研究项目（自然科学类）重点项目（2022AH050449）; 安徽省第12批“115”创新团队（皖人才办）﹝2019﹞1号）; 安徽省名中医刘健工作室建设项目（中医药发展秘﹝2018﹞11号）; 安徽省中医药领军人才项目（中医药发展秘﹝2018﹞23号）资助