电凝法制作C57/BL6J小鼠局灶性脑缺血模型的评价

摘要

目的 通过改良电凝法制作小鼠局灶性大脑中动脉阻塞（MCAO）模型的方法、筛选适用于模型小鼠的评价指标，为开展脑缺血相关的长期研究提供模型参考。方法 选用C57/BL6J雄性小鼠46只，随机分为模型组（n=34）和对照组（n=12）。采用凝血器永久性凝断小鼠右侧大脑中动脉制备大脑中动脉闭塞模型。通过激光散斑血流成像仪监测造模前、造模后20 min、造模后1 d的脑血流灌注量；通过Longa评分、m NSS评分、平衡木行走实验、圆筒实验、转角实验评价小鼠造模后1、7、14 d的神经功能；采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测量缺血灶梗死范围，以评估模型是否成功及各指标之间的相关性。Western blotting检测缺血侧皮质中质纤维酸性蛋白（GFAP）、脑源性神经营养因子（BDNF）、双肾上腺皮质激素（DCX）蛋白表达。结果激光散斑血流成像仪监测显示，大脑中动脉电凝灼烧后缺血侧的脑血流量明显降低；与假手术组相比，模型组造模后1、7、14 d的Longa评分和mNSS评分明显升高（P<0.05）；平衡木行走实验结果显示，与假手术组相比，模型组造模后1、7、14 d评分均降低（P<0.05）；圆筒实验结果显示，与术前相比，造模后1、7、14 d模型组的前肢使用不对称性均增加（P<0.05）；转角实验结果显示，与术前相比，造模后1、7、14 d模型组的侧向指数均有提高（P<0.05）。TTC染色显示，假手术组大脑组织无损伤，模型组的梗死灶在手术侧大脑的感觉运动皮层区和尾壳核。Western blotting结果显示，与假手术组相比，模型组缺血侧脑皮层中GFAP的蛋白表达水平呈高表达，模型组1 d(P<0.05)、模型组7 d(P<0.01)、模型组14 d(P<0.01)的GFAP蛋白表达水平升高；DCX的蛋白表达水平在造模后1、7、14 d升高（P<0.05）;BDNF的蛋白表达水平升高，模型组1 d的BDNF蛋白表达水平在缺血后显著升高（P<0.05）。结论 将电凝位置由MCA与大脑下静脉交界的远端位置改为MCA与嗅束交界内侧2 mm段部位可以成功制备小鼠MCAO模型，该模型可用于脑缺血后急慢期神经功能修复机制及神经可塑性等方面的研究。

关键词

电凝法 / 大脑中动脉 / 脑缺血小鼠 / 评价指标

基金资助

国家自然科学基金青年科学基金（82105021）