C/EBPβ介导NPHP1敲低的肾小管上皮细胞TNF-α通路下游炎症因子的表达

摘要

目的 探讨NPHP1基因缺陷肾小管上皮细胞TNF-α信号通路激活及其调控的炎症因子表达。方法 使用重组慢病毒LVNPHP1-RNAi构建敲低NPHP1表达的人近端肾小管细胞株（HK2）细胞(NPHP1^KDHK2)。通过实时荧光定量PCR、Western blot、酶联免疫吸附实验法检测各细胞株TNF-α表达、p38和C/EBPβ激活状态及其调控炎症因子CXCL5、CCL20、IL-1β、IL-6、MCP-1等表达情况。通过构建siRNA敲低野生型和NPHP1^KDHK2细胞C/EBPβ表达，观察上述指标变化。结果 敲低NPHP1表达后，NPHP1^KDHK2细胞TNF-α、C/EBPβ、CXCL5、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加（P<0.05）;Western blotting结果显示，phospho-p38、C/EBPβ表达上调（P<0.05）；培养液上清IL-6水平增加（P<0.05）。使用siRNA敲低C/EBPβ表达后，NPHP1^KDHK2细胞CSF2、CCL20、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平下调（P<0.05）;Western blot显示phospho-p38表达下调（P<0.05）；培养液上清IL-6水平下降（P<0.001）。结论 NPHP1基因缺陷的NPHP1^KDHK2细胞中TNF-α信号通路被激活，其调控的下游印证因子表达上调。C/EBPβ可能是介导NPHP1^KDHK2细胞TNF-α信号通路相关炎症因子表达的关键转录因子。

关键词

肾单位肾痨 / TNF-α / C/EBPβ / 炎症因子 / NPHP1

基金资助

广东省自然科学基金（2022A1515012307;2020A1515010286）; 北京白求恩公益基金会（SCE093DS）; 南方医科大学南方医院院长基金青年项目（2020C021）