神经特异性跨膜蛋白240与过氧化物酶体共定位并激活RhoGDP解离抑制因子β

摘要

目的 探究跨膜蛋白240(TMEM240)的亚细胞定位及其生物学功能。方法 用NCBI的BLAST工具对蛋白质序列分析，TMHMM生物信息学软件对TMEM240跨膜结构进行分析；体内实验：取18～20 d的雄性C57BL/6小鼠脑组织，设置TMEM240探针组和对照组（3只/组），采用原位杂交技术验证TMEM240在脑组织中的表达分布；采用qPCR、Western blotting检测小鼠不同组织、不同时间皮层神经元TMEM240的表达情况（3只/组）；体外实验：采用质粒转染完成Tmem240过表达体系的构建及稳定克隆的筛选，采用细胞成像技术对TMEM240的亚细胞定位进行研究，确定TMEM240在细胞内的形态和分布，采用qPCR,Western blotting，免疫荧光检测TMEM240在细胞内表达情况并验证其生物学功能；结果 人源和鼠源TMEM240蛋白质序列相似性达97.69%,TMEM240为含有两个跨膜结构的跨膜蛋白；体内实验：TMEM240的mRNA和蛋白在脑组织及神经元中特异性高表达（P<0.001），原代神经元培养9 d时TMEM240表达水平最高（P<0.001）；体外实验：TMEM240在细胞内呈点状分布，属于细胞内膜性结构，并与过氧化物酶体具有80%共定位；过表达Tmem240的Neuro-2a细胞Rho GDP解离抑制因子β(ARHGDIB)的mRNA和蛋白表达均升高（P<0.05）。结论 TMEM240是一种定位于细胞内的新型亚细胞结构，在神经元中特异性表达，在靶向细胞功能调控方面具有巨大的潜力。

关键词

跨膜蛋白240 / 神经元 / 亚细胞定位 / 过氧化物酶体 / Rho GDP解离抑制因子β