复方积雪草减轻小鼠日本血吸虫引起的肝纤维化:通过调控TLR4/MyD88通路抑制炎症-纤维化级联反应

摘要

目的 基于网络药理学和分子对接，联合日本血吸虫（Sj）感染小鼠引起肝纤维化实验验证，探究复方积雪草（CCA）有效成分抗Sj病肝纤维化的作用机制。方法 利用传统中药系统药理学数据库筛选CCA的活性成分及其作用靶点，与Sj病肝纤维化发病机制相关的靶点进行比对，获得CCA抗Sj病肝纤维化的潜在作用靶点；采用STRING数据库，构建药物疾病交集靶点的PPI网络，筛选核心靶点；通过Cytoscape 3.9.1构建“药物-成分-靶点-通路-疾病”网络图；运用David数据库进行GO和KEGG富集分析；利用PyMol和AutoDockVina1.1.2对CCA主要活性成分与核心靶点使用分子对接技术进行活性验证。将36只小鼠随机均分为正常对照组（control）、模型组（Sj）、复方积雪草组（Sj+CCA）;control组不做任何处理，其余经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴建模成功8周后，分别每天灌胃生理盐水和CCA水煎剂，连续8周。采用HE、Masson染色法检测小鼠肝组织病理变化；免疫组化染色检测肝脏Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ的表达水平；ELISA法测定小鼠血清中IL-6和TNF-α水平变化；蛋白质印迹法检测肝组织TLR4(TOLL样受体4)、MyD88（髓分化因子88）蛋白表达。结果 筛选得到107种CCA活性成分（OB≥30%,DL≥0.18）,791个成分靶点，Sj病肝纤维化靶点集和CCA靶点集进行交集分析后共得到37个关键靶点。其中TNF、TP53、JUN、MMP9、CXCL为核心靶点，涉及的主要信号通路为Lipid and atherosclerosis、IL-17 signaling pathway、Fluid shear stress and atherosclerosis、Chagas disease、Pathways in cancer等。分子对接结果提示，CCA107个活性成分中槲皮素与TNF、TP53、JUN、MMP9有较好的结合活性。在小鼠Sj病肝纤维化模型中，CCA处理能够减轻炎性细胞浸润，减少Collagen-I、Collagen-Ⅲ沉积（P<0.001,P<0.01），改善肝组织结构，降低其炎症因子IL-6、TNF-α的含量（P<0.05），下调TLR4、MyD88蛋白表达（P<0.01）。结论 CCA可能作用于TNF、MMP9、JUN、TP53靶点，调控TLR4/MyD88信号通路，抑制IL-6、TNF-α等促炎因子释放，进而减少HSC活化及胶原纤维产生，降低ECM的沉积，阻断Sj虫卵肉芽肿的形成，发挥抗Sj感染引起的肝纤维化和保肝的作用。

关键词

日本血吸虫病肝纤维化 / 复方积雪草 / 网络药理学 / 分子对接 / 实验验证