扶正化积汤治疗非小细胞肺癌的分子机制:基于网络药理学及体外实验验证

摘要

目的 通过网络药理学、分子对接和体外实验探究扶正化积汤治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的作用机制。方法 通过TCMSP、SwissTargetPrediction数据库筛选扶正化积汤活性成分及其作用靶点。通过在GeneCards、PharmGKB数据库获取NSCLC相关靶点，与扶正化积汤活性成分靶点取交集。利用STRING数据库建立蛋白相互作用（PPI）网络，使用Cytoscape3.8.2软件CytoNCA插件筛选PPI网络核心靶点，利用DAVID6.8数据库进行GO和KEGG通路富集分析。使用A549细胞开展体外实验进行靶点验证，CCK-8法检测扶正化积汤含药血清对A549细胞增殖的影响。Annexin V-FITC/PI染色检测含药血清对A549细胞凋亡的影响。Western blotting检测含药血清对关键通路中相关蛋白表达的影响。结果 扶正化积汤活性成分共140个，药物和疾病交集靶点共707个，PPI网络核心靶点有TP53, AKT1,HIF1A, GAPDH,ALB,EGFR,CTNNB1,TNF等，GO分析显示主要生物学过程为转移酶、激酶、受体、水解酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、氧化还原酶等，KEGG通路富集显示主要信号通路为PI3K-AKT信号通路、Ras信号通路、钙离子信号通路、MAPK信号通路等。分子对接结果显示，药物有效成分与TP53、AKT1、HIF1A均有效对接。体外实验结果：CCK-8实验确定以2.5%、5%、10%为扶正化积汤含药血清的低、中、高浓度（P<0.05,P<0.01,P<0.0001）。细胞凋亡实验显示扶正化积汤含药血清不同程度促进A549细胞凋亡（P<0.01,P<0.001）。Western blotting结果显示，扶正化积汤下调A549细胞中HIF1A、p-AKT 308和TP53蛋白的表达水平（P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001）。结论 扶正化积汤可能通过调控HIF1A,p-AKT 308,TP53蛋白的表达，抑制A549细胞增殖，发挥治疗NSCLC的潜在作用。

关键词

扶正化积汤 / 非小细胞肺癌 / 网络药理学 / 分子对接 / 体外实验