精胺抑制巨噬细胞中GBP5介导的NLRP3炎性小体活化减轻感染肠道病毒71型的新生小鼠脏器损伤

摘要

目的 基于巨噬细胞中GBP5调控NLRP3炎症小体活化，探究精胺（Spm）治疗肠道病毒71型（EV71）感染引起的重症手足口病的机制。方法 体内实验：将3～5 d龄的BALB/c乳鼠随机分为对照组（CON组）、感染组（EV71组）、治疗组（SPM组），感染组和治疗组每只腹腔注射浓度为1×10～6半数组织培养感染剂量（TCID50）病毒液50μL，治疗组在注射病毒3 d后注射100μmol/L精胺50μL，对照组腹腔注射无菌PBS 50μL。观察小鼠状态1周，提取小鼠心、肝、肺及肾组织全蛋白、RNA及组织切片，Western blotting、q PCR检测小鼠组织GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平，HE染色观察小鼠组织损伤及炎症细胞浸润状况，免疫组化法观察组织巨噬细胞浸润情况及GBP5的表达水平。体外实验：分别设置对照组（CON组）、感染组（EV71组）、治疗组（SPM组）、多胺生物合成抑制剂组。提取THP-1及RAW细胞RNA，通过RT-PCR检测细胞GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平。结果 与对照组相比，小鼠在感染EV71后心、肝、肺及肾组织出现明显损伤，其中心、肺组织中明显观察到巨噬细胞的浸润。心、肝、肺及肾组织中GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平明显升高（P<0.05）；经精胺治疗后，与感染组相比治疗组小鼠组织损伤明显改善，心、肺组织中的巨噬细胞浸润减少。精胺治疗后小鼠心、肝、肺及肾组织中NLRP3、GBP5、CXCL10、TNFSF10表达水平降低（P<0.05）。在THP-1及RAW细胞中发现，感染EV71病毒后GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达升高（P<0.05），经精胺治疗后细胞中GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达降低（P<0.05）。在THP-1细胞中使用多胺生物合成抑制剂减少精胺合成可改善由GBP5 si RNA干扰引起的GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达降低（P<0.05）。结论 精胺治疗可以降低EV71感染引起的巨噬细胞中GBP5介导的NLRP3炎症小体活化，减少炎症因子释放从而发挥治疗儿童重症手足口病的作用。

关键词

重症手足口病 / 肠道病毒71型 / NLRP3 / GBP5 / 巨噬细胞 / 精胺