眼针疗法通过上调METTL3介导的m⁶A甲基化修饰促进脑皮层血管新生进而改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能

摘要

目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠神经功能及缺血侧脑皮层组织血管新生的影响，基于METTL3介导的N6-甲基腺苷（m⁶A）甲基化修饰，上调HIF-1α/VEGF-A信号轴，促进血管新生，探究眼针改善CIRI模型大鼠神经功能的作用机制。方法 将50只SD大鼠随机分为正常、假手术、模型、眼针及激动剂组（n=10）。采用改良线栓法制备CIRI模型，分组干预后对大鼠进行神经功能评分，TTC染色比较脑梗死面积，尼氏体染色观察脑神经元损伤，CD31和EDU免疫荧光双标检测脑皮层组织血管新生，采用ELISA检测脑皮层组织m⁶A甲基化修饰水平，RT-PCR检测METTL3、HIF-1α/VEGF-A的mRNA表达，Western blotting检测METTL3、HIF-1α/VEGF-A的蛋白表达。结果 与正常组和假手术组比较，模型组大鼠神经功能评分明显升高（P<0.05），脑梗死面积明显增加（P<0.05），尼氏体数量明显减少（P<0.05）,CD31和EDU免疫荧光双标的新生血管数量增加，m⁶A甲基化修饰明显减少（P<0.05）,METTL3的蛋白及mRNA表达减少（P<0.05）,HIF-1α与VEGF-A的蛋白及mRNA表达增加（P<0.05）；与模型组比较，眼针和激动剂组神经功能评分明显下降（P<0.05），脑梗死面积明显减小（P<0.05），尼氏体数量明显增多（P<0.05）,CD31和EDU荧光双标的新生血管数量明显增多，m⁶A甲基化修饰明显增加（P<0.05），而HIF-1α与VEGF-A、METTL3的蛋白及mRNA表达亦明显增加（P<0.05）。眼针和激动剂组、正常和假手术组比较，各指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论 眼针能改善CIRI模型大鼠神经功能损伤，其机制可能与上调METTL3介导的m⁶A甲基化修饰，调节HIF-1α/VEGF-A信号轴，促进脑皮层血管新生有关。

关键词

眼针 / 脑缺血再灌注损伤 / m⁶A甲基化修饰 / HIF-1α/VEGF-A信号轴 / 血管新生