橙皮素通过调控AMPK/NLRP3通路减轻阿霉素诱导的小鼠心肌毒性

摘要

目的 探讨橙皮素（Hes）通过调控AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/NOD热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号减轻炎症反应改善阿霉素（DOX）诱导的心肌损伤。方法 采用DOX处理C57/bl6小鼠和H9c2细胞，并随机分为：对照组/假手术组、DOX处理组、Hes干预DOX组（DOX+Hes）以及Hes联合AMPK抑制剂Compound C干预DOX组（DOX+Hes+CC）。观察细胞形态变化，采用CCK-8法检测细胞活力，超声检测心脏功能，ELISA法检测培养基和心肌组织中LDH活性，TUNEL染色法检测细胞凋亡，RT-PCR检测TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平，Western blotting法检测cleaved caspase-3、Bcl2、Bax、IL-1β、IL-18、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果 与对照组相比，DOX组细胞肿胀，活力降低，培养基中LDH活性增加（P<0.01）;cleaved caspase-3表达和TUNEL染色阳性细胞数增加，Bcl2/Bax比值降低（P<0.01）。与假手术组相比，DOX组心肌纤维肿胀并出现炎性浸润，心脏功能降低，LDH活性增加；同时TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平以及IL-1β和IL-18的蛋白表达增加（P<0.01）,p-AMPK和p-mTOR蛋白表达降低，NLRP3、ASC和caspase-1的表达增加（P<0.01）。与DOX组相比，DOX+Hes组细胞肿胀减轻，活力增加，培养基中LDH活性降低（P<0.01）;cleaved caspase-3表达和TUNEL染色阳性细胞数减少，Bcl2/Bax比值增加（P<0.01）;TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平以及IL-1β和IL-18的蛋白表达降低（P<0.01）;p-AMPK和p-mTOR蛋白表达增加，NLRP3、ASC和caspase-1的表达降低（P<0.01）。与DOX+Hes组相比，Compound C可以阻断Hes对DOX诱导的细胞损伤、心脏功能、炎症反应和AMPK/NLRP3通路的作用。结论 Hes通过调控AMPK/NLRP3通路抑制炎症反应减轻DOX诱导的心脏毒性。

关键词

橙皮素 / 阿霉素 / AMPK/NLRP3 / 炎症反应 / H9c2细胞