S1PR5激动与过表达通过调控氧化应激增强脑微血管内皮细胞屏障功能抵抗氧糖剥夺/复氧复糖损伤

摘要

目的 探讨鞘氨醇1-磷酸受体5(S1PR5)对氧糖剥夺及复氧复糖（OGD/R）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响及相关机制。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3，使用OGD/R诱导屏障功能障碍，分别使用S1PR5特异性激动剂A971432、敲低S1PR5的siRNA及过表达S1PR5的慢病毒进行干预。设置对照组：bEnd.3正常培养；OGD/R组：bEnd.3进行OGD/R;A971432组：OGD/R组+A971432;siNC组：转染siNC+OGD/R;siS1PR5组：转染siS1PR5+OGD/R;OE NC组：感染慢病毒LV5-NC+OGD/R;OE S1PR5组：感染慢病毒LV5-S1PR5+OGD/R。RT-qPCR法分别检测敲低或过表达S1PR5的效率；采用CCK-8检测在不同培养条件下bEnd.3细胞的活力；采用FITC-dextran渗透法检测内皮屏障渗透性；采用细胞免疫荧光法检测蛋白的定位及表达；DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平；Western blotting法检测蛋白的表达水平。结果 CCK-8结果显示激动S1PR5可以增加OGD/R下调的细胞活力（P<0.0001）,FITC-dextran渗透法结果显示激动和过表达S1PR5可减少FITC-dextran的渗漏（P<0.001），而敲低S1PR5增加FITC-dextran的渗漏（P<0.001）。Western blotting及免疫荧光结果显示，与OGD/R组相比，激动和过表达S1PR5可以增加屏障蛋白ZO-1(P<0.05)、Occludin(P<0.05)的表达，而敲低S1PR5会下调ZO-1和Occludin(P<0.05)的表达。ROS检测结果显示，激动和过表达S1PR5能减少ROS的产生，而敲低S1PR5会增加ROS产生。Western blotting检测发现过表达S1PR5可以增加抗氧化蛋白Nrf2(P<0.0001)、HO-1(P<0.0001)、SOD2(P<0.01)的表达。结论 S1PR5受体的激动剂干预及基因过表达可显著改善OGD/R模型诱导的活力减少及通透性增加，而基因敲低S1PR5则加剧OGD/R诱导的功能损伤，其机制可能与减少ROS，上调抗氧化蛋白表达相关。

关键词

鞘氨醇1-磷酸受体5 / 血脑屏障功能障碍 / 氧化应激 / 氧糖剥夺/复氧复糖损伤