鬼箭羽通过抑制AGEs-RAGE信号转导通路改善晚期糖基化终末产物诱导的小鼠肾足细胞损伤

摘要

目的 观察鬼箭羽对晚期糖基化终末产物（AGEs）刺激的小鼠肾足细胞（MPC-5）AGEs-晚期糖基化终末产物受体（RAGE）信号转导通路及下游靶点的影响，并阐明鬼箭羽改善糖尿病肾脏疾病（DKD）足细胞损伤的机制。方法 鬼箭羽干预糖尿病肾脏疾病动物模型，利用透射电镜观察肾脏形态与结构；实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-qPCR）、免疫组化检测相关基因与核心蛋白的表达情况。体外培养MPC-5，采用浓度为50 mg/L糖基化终末期产物-牛血清白蛋白（AGEs-BSA）培养液孵育24 h，诱导建立糖尿病细胞模型。利用CCK-8法检测技术，评价造模后的细胞成活率。将对数生长期的MPC-5随机分为正常组、模型组、鬼箭羽组、RAGE激动剂（D-Ribose）组、鬼箭羽+RAGE激动剂（D-Ribose）组，利用CCK-8法筛选不同浓度鬼箭羽对MPC-5细胞活力的影响。蛋白免疫印迹法检测各组细胞RAGE、VEGFA、TNF-α、NF-κB(p65)、IL-6、Caspase-3蛋白表达；RT-qPCR检测RAGE、NF-κB(p65)、VEGFA、IL-6mRNA表达。结果 体内结果表明，鬼箭羽干预后，与模型组相比，干预组动物模型肾脏组织足细胞病理变化有所改善。免疫组化结果显示，与模型组比较，鬼箭羽高剂量组RAGE、VEGFA、NF-κB(p65)、IL-6蛋白表达降低（P<0.05）;RT-qPCR结果显示，与模型组比较，鬼箭羽高剂量组RAGE、NF-κB、IL-6mRNA表达降低（P<0.05）。体外结果表明，与正常组相比，模型组细胞活力显著降低（P<0.05）,RAGE、NF-κB(p65)、VEGFA、TNF-α、IL-6和Caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）,RAGE、NF-κB(p65)、VEGFA和IL-6 mRNA表达升高（P<0.05）；与模型组比较，浓度为550 mg/L的鬼箭羽干预成模后的MPC-5,24 h提高细胞活力最为显著（P<0.05），降低RAGE、NF-κB(p65)、VEGFA、TNF-α、IL-6和Caspase-3蛋白表达（P<0.05）；而鬼箭羽+RAGE激动剂可逆转RAGE激动剂对MPC-5模型中RAGE、VEGFA、TNF-α、IL-6和Caspase-3蛋白表达的改变（P<0.05），同时与RAGE激动剂组比较，鬼箭羽+RAGE激动剂组RAGE、NF-κB(p65)、IL-6、VEGFAmRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 鬼箭羽可以通过抑制AGEs-RAGE信号转导通路的激活，减少下游促炎细胞因子和血管内皮生长因子的表达，进而发挥改善AGEs诱导糖尿病肾脏疾病MPC-5损伤的作用。

关键词

鬼箭羽 / 糖尿病肾脏疾病 / 足细胞 / AGEs-RAGE信号通路 / 晚期糖基化终末产物