脑络欣通通过激活HIF-1α/VEGF信号通路促进氧糖剥夺/复氧复糖损伤后大鼠的脑微血管内皮细胞增殖

摘要

目的 探讨脑络欣通（NLXTD）靶向缺氧诱导因子/血管内皮生长因子（HIF-1α/VEGF）信号通路对大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）损伤后增殖的影响及其作用机制。方法 构建OGD/R损伤BMECs模型，随机分为5组：正常细胞组（Normal）、模型组（OGD/R）、脑络欣通血清组（OGD/R+10%NLXTD）、脑络欣通血清+HIF-1α通路阻断剂组（OGD/R+10%NLXTD+2ME2），脑安颗粒血清组（OGD/R+10%NAKL），并分别给予相应的药物干预24 h。利用CCK-8法评估NLXTD对BMECs增殖以及对BMECs通透性的影响；采用Transwell实验、管腔形成实验检测NLXTD对BMECs迁移和管腔形成的影响；采用ELISA法检测VEGF含量的表达，采用激光共聚焦免疫荧光法检测VEGF、Notch含量的表达。采用Western blotting法检测HIF-1α、VEGFR2及其下游信号通路中Notch1以及ERK、P-ERK1/2蛋白的表达。结果 BMECs经OGD/R诱导后细胞活力出现明显下降（P<0.01），相较于OGD/R组，NLXTD能显著促进BMECs增殖、促进其迁移和管腔形成能力（P<0.01），而NLXTD+2ME2组相较NLXTD组，细胞的增殖、迁移、成管能力下降（P<0.01）。ELISA实验结果显示，与OGD/R组比较，NLXTD可促进BMECs上清VEGF表达（P<0.01），激光共聚焦免疫荧光实验结果同样显示，相较于OGD/R组，NLXTD组VEGF与Notch阳性细胞数占比提升（P<0.01）,Western blotting实验结果进一步显示，NLXTD提高了HIF-1α、VEGFR2、及VEGF下游Notch1、P-ERK1/2蛋白表达量（P<0.01）。结论 NLXTD能够促进OGD/R损伤后BMECs增殖，影响血管新生，其机制可能与调控HIF-1α/VEGF信号通路有关。

关键词

缺血性脑卒中 / 脑络欣通 / HIF-1α/VEGF信号通路 / 氧糖剥夺/复氧复糖 / 脑微血管内皮细胞