Circ＿0000437通过靶向let-7b-5p/CTPS1轴促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化

摘要

目的 探讨环状RNA(circ＿0000437)对乳腺癌细胞功能的影响及其分子机制。方法 体外培养人乳腺细胞（MCF-10A）和人乳腺癌细胞（MCF-7和MDA-MB-231），乳腺癌细胞经过分别转染后设置sh-circ＿0000437组、mimics组、inhibitor组、siCTPS1组及其阴性对照组、sh-NC+inhibitor-NC组、sh-circ＿0000437+inhibitor-NC组、sh-circ＿0000437+inhibitor组、sh-NC+pc DNA-NC组、sh-circ＿0000437+pc DNA-NC组、sh-circ＿0000437+pc DNA-CTPS1组。q RT-PCR检测乳腺癌细胞株或组织中circ＿0000437、let-7b-5p、CTPS1、Notch1、Hes1和Numb的基因表达水平，RNase R检测鉴定circ＿0000437的环状结构，亚细胞定位检测显示circ＿0000437在乳腺癌细胞中的分布，CCK-8检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，双荧光素酶报告基因和RNA免疫共沉淀实验探究circ＿0000437/let-7b-5p/CTPS1间的结合位点，Western blotting检测细胞中CTPS1,E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达，小鼠体内成瘤实验验证circ＿0000437与CTPS1在体内促癌的作用机制。结果 Circ＿0000437和CTPS1在乳腺癌组织和细胞系中的表达均上调，let-7b-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达下调（P<0.01），敲低circ＿0000437或CTPS1均可抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（P<0.05），过表达let-7b-5p同样抑制乳腺癌的恶性生物学行为，而抑制let-7b-5p则相反（P<0.05）,sh-circ＿0000437+pc DNA-NC组的乳腺癌细胞在小鼠体内的生长速度低于sh-NC+pc DNA-NC组，sh-circ＿0000437+pc DNA-CTPS1组生长速度高于sh-circ＿0000437+pc DNA-NC组（P<0.01）,circ＿0000437和let-7b-5p、let-7b-5p和CTPS1之间存在结合位点（P<0.01）,circ＿0000437,let-7b-5p和CTPS1在乳腺癌细胞中存在相互作用（P<0.05）。结论 Circ＿0000437在乳腺癌组织和细胞中表达上调，且circ＿0000437可以通过let-7b-5p/CTPS1轴促进乳腺癌细胞的增殖，侵袭，迁移以及上皮间质转化。

关键词

乳腺癌 / 上皮间质转化 / 环状RNA / 竞争性内源RNA