lncRNA HClnc1通过靶向RBBP5/KAT2B复合物增强ODC1转录促进肝癌细胞生长和转移

摘要

目的 观察长链非编码RNA ENSG00000271218.1(lncRNA HClnc1)对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响，探索其作用机制。方法 基于TCGA数据库分析HClnc1在临床肝癌组织中的表达水平；BrdU掺入、平板克隆及Transwell方法检测干扰/过表达HClnc1及干扰ODC1对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响；BrdU参入和Transwell方法检测同时过表达HClnc1和干扰ODC1对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响；qRT-PCR和免疫印迹分析干扰HClnc1对肝癌细胞ODC1蛋白和mRNA表达的影响；双荧光素酶报告基因分析ODC1启动子活性；Pull-down、质谱分析和Co-IP鉴定与HClnc1结合蛋白及其相互作用；RNA干扰及ChIP分析等方法研究与ODC1启动子区域结合的蛋白及结合效率。结果 HClnc1在肝癌组织中明显升高（P<0.001）；干扰HClnc1后增殖、侵袭和迁移的肝癌细胞数量明显减少（P<0.001）；过表达HClnc1则增加了增殖、侵袭和迁移的细胞数量（P<0.001）；干扰ODC1后减少了增殖、侵袭和迁移细胞数量，且抵消了过表达HClnc1的促进作用（P<0.01）；干扰HClnc1后ODC1启动子活性明显降低（P<0.001）;HClnc1均能与RBBP5和KAT2B蛋白结合，干扰HClnc1后则阻止了RBBP5和KAT2B相互结合；过表达HClnc1上调ODC1蛋白表达，干扰RBBP5或KAT2B则下调ODC1蛋白表达，并且减少HClnc1诱导的ODC1蛋白上调；RBBP5和KAT2B能直接结合在ODC1的启动子区域，干扰KAT2B或RBBP5则降低结合效率（P<0.001），而干扰HClnc1则会减少RBBP5和KAT2B与ODC1启动子区域的结合（P<0.001）。结论 lncRNA HClnc1通过靶向RBBP5/KAT2B表观遗传修饰复合物，增加ODC1启动子活性，提高ODC1转录水平，从而促进肝癌细胞的生长和转移。

关键词

lncRNA / 肝癌 / RBBP5 / KAT2B / ODC1 / HClnc1