真核表达肝药酶UGT1A9可溶重组蛋白方法探索

尹鑫俐; 戚旭丹; 涂予溪; 陆茜; 杨元; 陈侠斌; 童骏森

doi:10.19926/j.cnki.issn.1674-232X.2023.04.003

杭州师范大学学报（自然科学版） ›› 2023, Vol. 22 ›› Issue (4) : 351 -357. DOI: 10.19926/j.cnki.issn.1674-232X.2023.04.003

真核表达肝药酶UGT1A9可溶重组蛋白方法探索

尹鑫俐, 戚旭丹, 涂予溪, 陆茜, 杨元, 陈侠斌, 童骏森

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摘要

UDP-葡萄糖醛酸基转移酶（UGTs）是人体重要的肝脏药物代谢酶，其底物选择性、催化机制等研究因难以获得可溶性全酶而受到限制.本研究以制备UGT1A9可溶重组蛋白为研究目标，通过筛选重组蛋白表达体系、融合标签种类及linker长度，优化重组蛋白表达纯化条件和方法，实现了重组UGT1A9的大量制备.HEK293F细胞分泌表达的His₈-MBP-NSAS-UGT1A9（氨基酸25-466）重组蛋白经Ni-TED亲和纯化介质从培养基上清液中分离，洗脱产物经SDS-PAGE、Western blot及MS检测鉴定为目的蛋白，通过Bradford法测得重组蛋白最终产量为2 mg/L,纯度达到95%以上.本研究建立了一种人源药物代谢酶UGT1A9的可溶重组蛋白表达纯化方法，为UGT1A9及UGTs同工酶的药物代谢、催化机制及结构解析研究奠定基础.