去SUMO化酶SENP5的表达、纯化、活性测定及复合物重组

刘晶晶; 王涛; 曾羽鑫; 陈宣佑; 刘兵

doi:10.19926/j.cnki.issn.1674-232X.2023.04.261

杭州师范大学学报（自然科学版） ›› 2024, Vol. 23 ›› Issue (5) : 487 -494+503. DOI: 10.19926/j.cnki.issn.1674-232X.2023.04.261

去SUMO化酶SENP5的表达、纯化、活性测定及复合物重组

刘晶晶, 王涛, 曾羽鑫, 陈宣佑, 刘兵

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摘要

SENP5参与转录调控、蛋白质稳态、DNA修复和细胞分裂等重要生命过程，与癌症、发育缺陷和神经变性等疾病密切相关.SENP5包含N端的无规则卷曲和C端的催化结构域.研究对SENP5的催化结构域(SENP5CD)进行了表达和纯化.C末端水解活性实验表明SENP5CD对SUMO2前体(pSUMO2)的切割活性大于SUMO1前体(pSUMO1).分子筛实验证明，SENP5能够与SUMO1和SUMO2的前体、RanGap1-SUMO1和RanGap1-SUMO2形成稳定的复合物.实验构建了SUMO1-PA和SUMO2-PA活性探针，这2种活性探针都能与SENP5CD反应形成共价结合的复合物.通过比较AlphaFold预测的SENP5CD-pSUMO1和SENP5CD-pSUMO2复合物结构，发现pSUMO2与SENP5CD的结合比pSUMO1更紧密.研究表达、纯化了SENP5,鉴定了酶活性，获得了SENP5CD与底物的复合物，为进一步研究SENP5奠定了基础.