青稞根际拮抗菌筛选及其发酵液的抑菌活性研究

Screening of Rhizobacteria from the Rhizosphere of Highland Barley and the Antibacterial Activity of Their Fermentation Broths

摘要

青稞（Hordeum vulgare L. var. nudum）是西藏主要粮食作物，在青藏高原广泛种植，具重要经济与生态价值。但西藏地区的独特环境致麦类病害频发，化肥农药的过度使用严重威胁生态。本研究为探寻环境友好生物防治法，从青稞根际土筛选拮抗菌株，通过平板对峙法评估抑菌活性、研究发酵滤液特性及促生特性，以筛选优良菌株，为开发青稞专用微生物肥料提供支持。研究结果表明：从健康青稞根际土壤中分离获得5株对赤霉病菌（Fusarium graminearum）和根腐病菌（Fusarium solani）具有显著拮抗作用的菌株，经形态学观察和16S rRNA基因序列分析鉴定，菌株QK-1属于假单胞菌属（Pseudomonas sp.）、菌株QK-7和QK-32属于产碱杆菌属（Alcaligenes sp.）、菌株QK-17属于窄食单胞菌属（Stenotrophomonas sp.）、菌株QK-18属于芽孢杆菌属（Bacillus sp.）；发酵滤液抑菌试验显示，菌株QK-7和QK-17对靶标病原菌具有显著抑制作用，其效果分别为76.66%和90.84%，且在60 ℃ ~ 80 ℃ 温度范围内保持稳定；综合抑菌活性和促生特性评估，QK-7菌株表现出最优异的生物防治潜力。本研究结果为开发适用于西藏地区麦类作物的生物防治制剂提供了重要的菌种资源和技术支撑。

Abstract

Barley (Hordeum vulgare L. var. nudum) is a major food crop in Xizang, widely cultivated on the Tibetan Plateau, with important economic and ecological values. However, the unique environment of Xizang has resulted in the frequent occurrence of wheat diseases, and the excessive use of chemical fertilizers and pesticides has seriously threatened the ecology. This study aimed to explore the environmentally friendly biological control method, from the barley inter-root soil screening antagonistic strains, study fermentation filtrate characteristics and the promotion of the characteristics of the screening of good strains, through the plate standoff method to assess the inhibitory activity, and provide support for the development of barley special microbial fertilizers.The results showed: Five strains with significant antagonistic effects against Fusariumgraminearum and Fusarium solani were isolated from healthy barley rhizosphere soil. Morphological observation and 16S rRNA gene sequencing identified them as Pseudomonas sp. QK-1, Alcaligenes sp. QK-7 and QK-32, Stenotrophomonas sp. QK-17, and Bacillus sp. QK-18; Fermentation filtrate tests revealed that strains QK-7 and QK-17 exhibited significant inhibitory effects on target pathogens with 76.66% and 90.84%, with stable activity within the temperature range of 60 °C ~ 80°C; Comprehensive evaluation of antimicrobial activity and growth-promoting traits indicated that strain QK-7 demonstrated the most promising biocontrol potential. These findings provide valuable microbial resources and technical support for developing biocontrol agents suitable for cereal crops in Xizang.

Graphical abstract

关键词

青稞 / 根际拮抗菌 / 发酵滤液 / 抑菌活性 / 促生特性 / 生物防治

Key words

Barley / Rhizosphere antagonistic bacteria / Fermentation filtrate / Antimicrobial activity / Growth-promoting traits / Biocontrol

青稞（Hordeum vulgare L. var. nudum）属于禾本科大麦属，是大麦的一个变种，在全世界均有种植，在我国主要种植于西藏、青海、云南、甘肃、四川等省区海拔较高的地区，是最重要的粮食作物之一，因其具有成熟期短、耐寒性强、适应性广等特点，能够在海拔超过4 200 m的高寒地区种植^[1]。并且青稞富含多种氨基酸、膳食纤维、维生素和人体所需要的微量元素，具有卓越的药用价值和丰富的营养价值，还可用于酿造青稞酒、制饴糖、用作饲料等。近年来，随着西藏经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，对青稞的需求持续增长，然而，农作物病虫害如赤霉病^[2]、根腐病等，已成为制约青稞产量的主要因素，严重威胁粮食安全。

在自然条件下，植物被大量的微生物定植，这些微生物的密度往往远超植物自身的细胞数量^[3]。Marilinda Lorenzini^[4]等研究者针对枯萎葡萄上的附生细菌，以及这些细菌对葡萄腐烂真菌的拮抗菌株进行了深入筛选，发现芽孢杆菌属、短杆菌属、卷曲杆菌属、微球菌属、假单胞菌属和葡萄球菌属等微生物对引起葡萄腐烂的真菌，如灰霉菌、扩展青霉和乌瓦曲霉等，表现出显著的拮抗作用，其中芽孢杆菌属占据主导地位；枯草芽孢杆菌HlJ-3炭疽菌和细链格孢菌的菌丝生长具有强烈的抑制作用，其拮抗效果分别达到69.92%和68.08%^[5]。

根际微生物在植物生长过程中发挥至关重要的作用。它们不仅促进植物对无机和有机大分子化合物的吸收，改善土壤营养状况，还能帮助植物抵御生物和非生物胁迫，增强植物免疫力^[6]。Zhewei Yan^[7]等学者从猕猴桃根际土中分离出不动杆菌属、芽孢杆菌属、黄杆菌属、谷氨酸杆菌属、赖西杆菌属、溶杆菌属、假单胞菌属及链霉菌属等多种微生物，这些微生物在平板上对猕猴桃细菌性溃疡病菌均表现出了一定的抑制作用；Xiaofeng Su^[8]等从棉花根际分离的芽孢杆菌ABL F-18、ABL F-50和Paenibacillus sp. ABLF-90能显著降低棉花大丽轮枝菌的病害指数至对照的40% ~ 70%；Cumhur Avsar^[9]在水稻根际共分离出119种细菌，其中，15.47%细菌具有磷酸盐溶解能力，47.05%细菌具有分泌IAA能力，89.07%细菌具有产铁载体能力，10.08%细菌具有ACC脱氨酶活性，这些研究为根际微生物在植物病害防治中的应用提供重要依据。

目前，植物病害的防治主要依赖于化学防治、物理防治、生物防治和农业防治等多种手段。其中，生物防治作为一种环境友好型病害防治方法，通过利用有益生物抑制有害生物的生长，逐渐成为研究热点^[10]。植物有益微生物菌剂因其生态安全性高、防治效果显著、特异性强、生产成本低，同时兼具促进植株生长、提高农产品品质和产量等优势，已成为病害防治领域的重要研究方向。拮抗细菌通过高密度定殖于植株根际或植株内部，与病原菌竞争养分、水分和生存空间，从而有效降低植物病害的发生率。研究表明，从植物内生菌中分离的拮抗细菌不仅对植物病原真菌具有显著的抑制作用，还能增强植物的抗病能力，为开发新型生物防治制剂提供了重要资源。近年来，国内外学者在利用有益微生物防治病害方面开展了大量研究，许多拮抗菌株已被开发成微生物菌剂并广泛应用于商业化生产，取得了初步成效^[11]。

本研究以西藏林芝地区青稞根际土壤为研究对象，从中分离根际细菌，采用平板对峙法筛选具有拮抗活性的菌株，并对其发酵液的热稳定性及促生特性进行系统研究。研究旨在为高原青稞根际促生菌的开发与利用提供理论基础和科学依据，同时为青稞病害的生物防治提供新的技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试土样

采集自西藏林芝市代表性青稞农田的根际土壤样品。选择健康植株，抖落松散土壤后，将细根装入无菌采样袋，4 ℃保存并带回实验室用于根际细菌分离。

1.1.2 供试病原菌

赤霉病菌、根腐病菌由西藏农牧学院植物科学学院植物病理实验室提供。

1.1.3 培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：称取200 g马铃薯，20 g葡萄糖，18 g琼脂粉，蒸馏水定容至1 L^[12]。

LB固体培养基：称取10 g胰蛋白胨，5 g酵母粉，10 g氯化钠，18 g琼脂粉，蒸馏水定容至1 L^[13]。

LB液体培养基：称取10 g胰蛋白胨，5 g酵母粉，10 g氯化钠，蒸馏水定容至1 L。

固氮阿须贝培养基：甘露醇10 g，氯化钠0.2 g，三水磷酸氢二钾0.5 g，碳酸钙1 g，酵母膏0.4 g，七水合硫酸镁0.2 g，琼脂粉18 g去离子水1 L^[14]。

亚力山德罗夫培养基：氯化铁0.005 g，碳酸钙0.1 g，磷酸钙2 g，钾长石粉2 g，七水合硫酸镁0.5 g，葡萄糖5 g，溴百里香酚蓝5 g，琼脂粉17 g，蒸馏水1 L^[15]。

1.1.4 供试反应液^[16]

PC比色液：称取FeCl₃ 12 g溶于300 mL蒸馏水，然后缓慢加入429.7 mL 98% H₂SO₄，待冷却后定容至1 L，测定范围0.3 ~ 20 mg/L。

S2比色液：将4.5 g FeCl₃溶于300 mL蒸馏水，然后缓慢加入587.4 mL 98% H₂SO₄，待冷却后定容至1 L，测定IAA范围5 ~ 200 mg/L。

1.2 拮抗菌的筛选

1.2.1 细菌的分离与纯化

采用稀释涂布法^[17]分离根际细菌。称取10 g土样加入90 mL无菌水，200 r/min振荡1 h，依次稀释至10⁻⁴、10⁻⁵、10⁻⁶。取100 μL菌液涂布于LB培养基，28 ℃培养48 h，挑取差异明显的单菌落划线纯化。

1.2.2 拮抗细菌的筛选

采用对峙培养法^[18]筛选拮抗菌。将病原菌菌饼（直径5 mm）接种于PDA平板中央，距菌饼2.5 cm处划线接种根际细菌，28 ℃培养，观察病原菌生长情况。初筛后选取抑制效果显著的菌株进行复筛，计算抑制率：

\mathrm{抑制}\mathrm{率}=(\mathrm{对照}\mathrm{菌落}\mathrm{直径}-\mathrm{处理}\mathrm{菌落}\mathrm{直径})/\mathrm{对照}\mathrm{菌落}\mathrm{直径}\times \mathrm{100}\mathrm{\%}（1）

1.3 拮抗菌的鉴定

1.3.1 拮抗菌的形态观察

将菌株划线接种于LB培养基，28 ℃培养2 d，观察菌落形态（形状、颜色、透明度等）并进行革兰氏染色及显微镜观察。

1.3.2 拮抗菌的分子生物学鉴定

提取细菌DNA，采用通用引物27F/1492R^[19]进行PCR扩增，测序后通过NCBI进行同源性比对。使用MAFFT v.7.520^[20]比对序列，MEGA 7^[21]矫正数据，IQTREE^[22]进行最大似然法（ML）分析。

1.4 拮抗菌的抑菌活性

1.4.1 发酵滤液的制备

将已活化的菌株接种于装有LB液体培养基的三角瓶中，28 ℃、160 r/min^-1震荡培养72 h，经4 ℃、12 000 r/min^-1离心10 min后去除沉淀物，将上清液经过无菌0.22 μm微孔滤膜过滤，得到的发酵滤液置于4 ℃冰箱保存备用。

1.4.2 发酵滤液抑菌活性测定

采用生长速率法，将发酵滤液分别与PDA按1:9的比例制备混合平板，待凝固后在其平板中央接种赤霉和根腐病菌，以无菌水的PDA培养基为对照，每个处理重复3次，25 ℃培养5 d后计算抑菌率。

1.4.3 挥发性有机物的抑菌活性^[23]

采用双平板对峙法检测VOCs抑菌活性。将拮抗菌接种于LB平板，病原菌接种于PDA平板，两平板倒置密封，25 ℃培养3 ~ 7 d，观察病原菌生长情况，计算抑制率。

1.4.4 发酵滤液热稳定性测定

将拮抗细菌发酵液分别置于60 ℃、70 ℃和80 ℃处理30 min，分别按1∶9的比例与PDA制成混合平板，接种赤霉病菌和根腐病菌菌饼，25 ℃培养5 d，以未经处理的发酵液和无菌水为对照，测定温度对抑菌活性成分的影响，每个处理3次重复。

1.5 拮抗细菌的促生特性测定

1.5.1 固氮能力测定

使用阿须贝固氮培养基测定拮抗细菌固氮能力。将待测拮抗菌株接在阿须贝培养基上，在30 ℃下静置培养3 d，观察有无菌落的形成，若有菌落在培养基上生长则具有固氮能力，若没有即无固氮能力。

1.5.2 解钾能力测定

使用亚历山德罗夫培养基测定拮抗细菌解钾能力。将待测拮抗菌株接于平板中央，28 ℃培养5 ~ 7 d后，观察菌落周围是否有橙色晕圈产生，若有橙色晕圈则菌株具有解钾的能力，无则反之，并记录数据，采用十字交叉法测量解钾圈直径（D）及菌落直径（d），D/d的数值越大，说明解钾效果越好。

1.5.3 产吲哚乙酸（IAA）能力测定

将待测菌株接种至LB液体培养基，摇床培养（28 ℃，180 r/min）1 d后，取菌悬液滴入试管中，同时加入等体积的Salkowski比色液相混合，并以加入未接菌的LB液体培养基与等体积Salkowski比色液的混合溶液为对照^[24]。将试管避光静置30 min，观察颜色变化，溶液颜色变粉则表示能够分泌IAA，颜色越深表示菌株分泌IAA的能力越强，不变色为表示菌株没有分泌IAA的能力。

1.5.4 拮抗细菌的促生能力测定

选取品质饱满且大小均匀的青稞种子，表面常规消毒（先放入无菌水洗涤，再放入5%次氯酸钠中浸泡洗涤5 min，再放入无菌水中漂洗，再放入75%乙醇中浸泡洗涤5 min，再放入无菌水漂洗），将处理过的种子放在30个10 mL无菌离心管中，每管30粒，并依次加入10 mL的5株菌发酵液的稀释液，即5×、10×、20×、50×、100×，在室温浸种1 d，对照组为10 mL纯水，然后分别放入到底部铺有滤纸的湿润皿中，置于25 ℃黑暗培养7 d，定时定量补充水分，试验重复3次。观察并记录，测定第7 d青稞种子根长、茎长以及干、鲜重。

2 结果与分析

2.1 拮抗菌的分离与筛选

从青稞农田采集的根际土壤样品，采用稀释涂布法分离根际细菌，进一步纯化后，通过平板对峙法，筛选出具有明显拮抗作用的细菌菌株，结果表明5个菌株中2个菌株对赤霉病菌有一定的抑制作用，分别是QK-1和QK-17，其抑制率达到68.70%和53.72%；4个菌株对根腐病菌有一定的抑制作用，分别是QK-1、QK-17、QK-18、QK-32，其抑制率达到78.10%、63.48%、56.51%、60.311%，如表1所示。

2.2 拮抗菌的鉴定

2.2.1 菌落形态和染色特征

对5株拮抗菌株进行观察，3株菌为白色，大部分菌株表面光滑，经过革兰氏染色可知，4株拮抗菌属于革兰氏阴性菌，1株拮抗菌属于革兰氏阳性菌，形状都为杆状，如表2所示。

2.2.2 拮抗菌的分子生物学鉴定

通过测序，获得5株拮抗菌的16S rRNA基因序列，长度约为1 429 bp，经过形态学与NCBI网站上进行BLAST对比，并构建最大似然法树，其分析结果初步鉴定为QK-1为假单胞菌属（Pseudomonas），其相似度达到99.58%；QK-7和QK-32为产碱杆菌属（Alcaligenes），相似度达到100%，QK-17为窄食单胞菌属（Stenotrophomonas），其相似度达到99.79%，QK-18为芽孢杆菌属（Bacillus），相似度达到99.93%，如图1所示。

2.3 拮抗菌的抑菌活性

2.3.1 发酵滤液的抑菌活性

菌株发酵滤液对赤霉病菌、根腐病菌的抑制作用，培养4 ~ 5 d之后，菌株QK-1、QK-7、QK-32发酵滤液对赤霉病原菌起到了一定的抑菌效果，其中QK-7的抑菌效果显著，抑菌率达到76.66%；5个菌株发酵滤液均对根腐病菌有一定的抑制效果，其中QK-1、QK-17的抑菌效果显著，抑菌率分别为88.22%、90.84%，如表3，图2、图3所示。

2.3.2 拮抗菌株发酵滤液的热稳定性

通过菌株发酵滤液的热稳定性测定发现，经过3个不同温度，即60 ℃、70 ℃、80 ℃处理30 min之后，QK-1、QK-7、QK-17菌株发酵滤液具有较好的热稳定性。与对照相比，在60 ℃ ~ 80 ℃温度下处理30 min，对其抑菌活性没有明显的影响。但随着温度的升高，对赤霉病菌和根腐病菌的抑菌活性开始下降，如表4所示。

2.3.3 拮抗菌株挥发性物质的抑菌活性

通过对5株菌挥发性有机物的抑菌活性测定，结果表明菌株QK-1对赤霉病菌有一定的抑制作用，第5d抑菌效果最好，达到48.036%；菌株QK-1、QK-7、QK-17对根腐病菌均有一定的抑制作用，其中菌株QK-7的抑菌效果最好，在第7 d抑菌效果达到42.724%，如表5、表6所示。

2.4 拮抗菌株的促生特性及促生能力验证

2.4.1 固氮能力

将拮抗菌接到阿须贝培养基上培养，其菌株QK-17、QK-32可以在固氮培养基上生长，说明这两株菌具有固氮能力，如图4所示。

2.4.2 解钾能力

将拮抗菌接于解钾培养基中央培养，菌株QK-7、QK-17、QK-18的菌落周围均有橙色晕圈产生，说明该3株菌具有解钾能力，其中菌株QK-7解钾效果最好，D/d为4，其他菌株解钾效果的D/d为3.2左右，如图5所示。

2.4.3 菌株产IAA能力测定

采用Salkowski比色法测定菌株分泌IAA的能力，其菌株QK-7、QK-17具有产IAA能力，如表7所示。

2.4.4 拮抗细菌对青稞幼苗生长的影响

2.4.4.1 不同浓度的细菌发酵液对青稞幼苗根长的影响

不同浓度拮抗细菌发酵液对青稞幼苗生长均有显著影响。随着浓度的降低，青稞幼苗的根长整体表现出先升后降的趋势。QK-1菌株在10倍稀释浓度时青稞幼苗根最长；QK-7和QK-17菌株均在20倍稀释浓度时青稞根最长；而QK-18和QK-32菌株分别在5倍稀释和50倍稀释浓度时青稞根最长。与对照相比，拮抗细菌发酵液对青稞的根长均有显著促进作用，如表8所示。

2.4.4.2 不同浓度的细菌发酵液对青稞幼苗茎长的影响

随着浓度的降低，青稞幼苗茎长表现出先升后降再升高的趋势，与对照相比，拮抗细菌发酵液对青稞的茎长均有显著促进作用，如表9所示。QK-1菌株对青稞茎的生长在5倍、10倍和100倍浓度时促生效果最好，其差异不显著；QK-7菌株在10倍浓度时青稞幼苗茎最长，与其他浓度之间差异显著；QK-17菌株对青稞茎的生长具有显著的促进作用，不同浓度之间没有显著差异；QK-18菌株在5倍、20倍、50倍和100倍浓度对青稞茎的促生效果最好，各浓度之间差异不显著；QK-32菌株在10倍、50倍和100倍浓度时对青稞茎促生效果最好，其差异不显著。

2.4.4.3 不同浓度的细菌发酵液对青稞幼苗鲜重的影响

相比对照，不同浓度的细菌发酵液对幼苗鲜重均有显著促进作用，QK-1和QK-7菌株在100倍稀释浓度时青稞幼苗鲜重最高；QK-17菌株均在20倍稀释浓度时青稞幼苗鲜重最高；而QK-18和QK-32菌株分别在5倍稀释浓度和100倍稀释浓度时青稞幼苗鲜重最高，如表10所示。

总之，与对照相比，QK-1菌株和QK-17菌株分别在10倍稀释浓度和20倍稀释浓度时对青稞幼苗生长具有良好的促进作用，而QK-7菌株在10倍稀释浓度和20倍稀释浓度时均有利于青稞幼苗的生长，QK-18菌株和QK-32菌株则分别在5倍稀释浓度和100倍稀释浓度时对青稞幼苗生长更好。

3 结论与讨论

根定殖细菌因其与植物的关系密切及其对植物有益的多种活性而受到深入研究^[25]。在过去的几十年里，植物根际微生物组对植物健康非常重要^[26]。不同的植物根际其优势菌群存在差异，Lin等^[27]的研究发现不同颜色表型的苋菜植物根际土壤微生物组成存在显著差异，其中，链霉菌属（Streptomyces）、假诺卡氏菌属（Pseudonocardia）、假单胞菌属（Pseudolabrys）、醋酸杆菌（Acidibacter）、norank_ f_ Micropepsaceae、慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）和诺卡菌属（Nocardioides）是红苋菜根际独特的土壤细菌优势属，相比之下，Conexibacter、norank_f_norank_o_norank_c_TK10 和 norank_f_ norank_o_ norank_ c_AD3 是绿苋菜根际的特殊优势土壤细菌属。本研究从西藏林芝市健康的土壤中分离出5株拮抗菌株，经16S rRNA初步鉴定QK-1为假单胞菌属（Pseudomonas）、QK-7和QK-32为产碱杆菌属（Alcaligenes）、QK-17为窄食单胞菌属（Stenotrophomonas）、QK-18芽孢杆菌属（Bacillus）。

邱睿^[28]等人报道分离到的2株假单胞菌对镰刀菌引起的几类病害起到一定的抑制效果，其中对茄镰刀菌（F. solani）抑制率分别为79.66%和76.68%，对尖孢镰刀菌（F. oxysporum）的抑制率分别为79.93%和57.48%，对烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、根串珠霉菌（Thielaviopsis basicola）等也有抑制效果；宋德显^[29]等在污染土壤中筛选到一株有效拮抗沙门氏菌的细菌，经过16S rDNA鉴定为产碱杆菌属；王芳^[30]等人报道筛选出的4株芽孢杆菌对镰刀菌的具有一定的抑制作用，其中对F. graminearum的抑菌率达到60%以上，对F. oxysporum，F. solani，F. longifundum以及F. equiseti也均有一定的抑制作用；Yi Wei^[31]等人报道嗜根瘤窄食单胞菌 JLS11对米分枝杆菌生长表现出强烈的抑制作用，这与本结果一致。

张晓云^[32]等人发现枯草芽孢杆菌BAB-1中的12种挥发物对番茄灰霉病菌起到抑制作用，其中二甲胺的抑菌作用最强，其次是甲酸、丙酸、二甲基二硫及丙胺，5种挥发物质均能通过消解、断裂，从而抑制番茄灰霉病菌的生长，直至杀死该病菌，本研究中QK-1挥发物对赤霉病菌具有抑制作用，QK-1、QK-7、QK-17挥发物对根腐病菌具有抑制作用，其中QK-7效果最好，但其活性物质、作用机制还需进一步研究。

生物活性成分在制造和处理过程中，往往会因为其固有的不稳定性而受到干扰^[33]。本研究将5株菌的发酵滤液进行60 ℃、70 ℃、80 ℃处理30 min发现，菌株QK-1、QK-7、QK-17对赤霉病菌和根腐病菌均有一定的抑菌作用，说明这3株菌活性成分比较稳定，具有制备生物农药的应用前景。

杜雪倩^[34]等从枸杞根际中筛选到了具有解磷、分泌IAA、固氮能力的芽孢杆菌属（Bacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）等促生菌。本研究中菌株QK-17、QK-32具有固氮作用；菌株QK-7、QK-17、QK-18具有解钾能力，其中QK-7的解钾效果最好；菌株QK-7、QK-17具有产IAA能力。

以上结果表明，QK-7和QK-17对赤霉病和根腐病有较好的抑制作用，发酵液的热稳定性较好，并且具有良好的促生作用。而菌株QK-7的抗病促生效果好于菌株QK-17，可以作为功能菌株制成生物制剂，为高原地区麦类作物高产、抵抗作物病害等提供有效措施。研究作物的根际生防细菌，不仅可以丰富根际促生菌资源，同时也可为西藏作物病害的生物防治奠定研究基础。

参考文献

[1] 李雪萍,刘梅金,许世洋,等.青稞普通根腐病的调查与病原鉴定[J].草业学报,2021,30:190-198.

[2] Windels C E. Economic and Social Impacts of Fusarium Head Blight: Changing Farms and Rural Communities in the Northern Great Plains [J]. Phytopathology, 2000, 90(1): 17-21.

[3] Mendes R, Garbeva P, Raaijmakers J M. The Rhizosphere Microbiome: Significance of Plant Beneficial, Plant Pathogenic, and Human Pathogenic Microorganisms [J]. FEMS Microbiology Reviews, 2013, 37.

[4] Lorenzini M, Zapparoli G. Epiphytic Bacteria from Withered Grapes and Their Antagonistic Effects on Grape-Rotting Fungi [J]. Elsevier, 2020.

[5] Wang Y, Jin M, Yang C, et al. Isolation and Identification of the Causal Agent of Gummy Stem Blight Disease in Cucumis Sativus Caused by a Bacterial Pathogen in China [J]. Scientific Reports, 2025, 14(1).

[6] Berendsen R L, Vismans G, Yu K, et al. Disease-Induced Assemblage of a Plant-Beneficial Bacterial Consortium [J]. Isme Journal, 2018.

[7] Yan Z, Fu M, Mir S H, et al. Diversity and Characterization of Antagonistic Bacteria against Pseudomonas Syringae Pv. Actinidiae Isolated from Kiwifruit Rhizosphere [J]. FEMS Microbiology Letters, 2023, 370: fnad078.

[8] Su X, Wu S, Liu L, et al. Potential Antagonistic Bacteria against Verticillium Dahliae Isolated from Artificially Infested Nursery [J]. Cells, 2021, 10(12): 3588.

[9] Avsar C. Assessment of Rice Rhizosphere-Isolated Bacteria for Their Ability to Stimulate Plant Growth and Their Antagonistic Effects against Xanthomonas Arboricola Pv. Juglandis [J]. 3 Biotech, 2024, 14(10): 229.

[10] 王杰,龙世芳,王正文,等.番茄青枯病防治研究进展[J].中国蔬菜,2020:22-30.

[11] 熊汉琴.番茄青枯病拮抗菌的筛选及其生防机制研究[D].广州:华南农业大学,2016.

[12] 李培谦,冯宝珍,李新秀,等.番茄灰霉菌拮抗放线菌la-5的筛选及鉴定[J].应用生态学报,2018,29:4172-4180.

[13] 贺字典,高玉峰,王燕,等.植物根际促生菌(Pgpr)解磷菌的筛选及其对番茄促生作用的研究[J].西南农业学报,2020,33: 2891-2896.

[14] 姜焕焕,祁佩时,王通,等.花生根际多功能固氮菌的分离及其耐盐碱特性研究[J].生物技术通报,2019,35:24-30.

[15] 王勇,陈燕琼,温书恒,等.一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定[J].安徽农业科学,2019,47:5-9.

[16] 李振东,陈秀蓉,李鹏,等.珠芽蓼内生菌z5产iaa和抑菌能力测定及其鉴定[J]. 草业学报, 2010, 19: 61-68.

[17] 程睿君,原晨虹,成巨龙,等.一株抗辣椒疫霉的根际细菌crj-9的筛选,鉴定及防治效果研究[J].河北农业大学学报,2019,42: 83-89.

[18] 周清,舒宪,王钰婷,等.一株小麦赤霉病拮抗菌的筛选鉴定及防治效果分析[J].生态科学,2019,38:64-70.

[19] Kanagawa T. Bias and Artifacts in Multitemplate Polymerase Chain Reactions (Pcr) [J]. Journal of bioscience and bioengineering, 2003, 96(4): 317-323.

[20] Katoh K, Misawa K, Kuma K I, et al. Mafft: A Novel Method for Rapid Multiple Sequence Alignment Based on Fast Fourier Transform [J]. Nucleic Acids Research, 2002, 30(14): 3059-3066.

[21] Kumar S, Stecher G, Tamura K. Mega7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets [J]. Molecular Biology Evolution, 2016, 33(7): 1870-1874.

[22] Minh B Q, Schmidt H A, Chernomor O, et al. Iq-Tree 2: New Models and Efficient Methods for Phylogenetic Inference in the Genomic Era (Vol 37, Pg 1530, 2020) [J]. Molecular Biology Evolution, 2020, (8): 37.

[23] 林玲,罗晓宇,王卿,等.生防内生细菌jaas Ed1挥发性有机物的抑菌促生长作用[J].江苏农业科学,2024,52:143-148.

[24] 张东艳,刘晔,吴越,等.花生根际产iaa菌的筛选鉴定及其效应研究[J].中国油料作物学报,2016,38:104-110.

[25] Pronk L J U, Bakker P a H M, Keel C, et al. The Secret Life of Plant-Beneficial Rhizosphere Bacteria: Insects as Alternative Hosts [J]. Environmental Microbiology, 2022, 24(8): 3273-3289.

[26] Berendsen R L, Pieterse C M J, Bakker P a H M. The Rhizosphere Microbiome and Plant Health [J]. Trends in Plant Science, 2012, 17(8): 478-486.

[27] Lin X R, Yang D, Wei Y F, et al. Amaranth Plants with Various Color Phenotypes Recruit Different Soil Microorganisms in the Rhizosphere [J]. Plants, 2024, 13(16): 2200.

[28] 邱睿,李小杰,李成军,等.烟草镰刀菌根腐病拮抗细菌的筛选鉴定及促生防病效果[J].中国烟草科学,2022,43:31-38.

[29] 宋德显,尹睿,林先贵,等.一株沙门氏菌拮抗菌的筛选及其在污染土壤原位修复中的应用[J].微生物学通报,2010,37:30-36.

[30] 王芳,于璐,齐泽铮,等.大豆镰刀菌根腐病拮抗菌的筛选及生防效果[J].生物技术通报,2024,40:216-225.

[31] Wei Y, Li L, Hu W, et al. Suppression of Rice Blast by Bacterial Strains Isolated from Cultivated Soda Saline-Sodic Soils [J]. International Journal of Environmental Research Public Health, 2020, 17(14): 5248.

[32] 张晓云,鹿秀云,郭庆港,等.枯草芽孢杆菌bab-1挥发性抑菌物质对番茄灰霉菌的抑菌作用[J].中国植物病理学会2017年学术年会,2017:1.

[33] 汪茜,胡春锦,柯仿钢,等.生防菌株1404的鉴定及其对采后柑橘炭疽病的防治效果[J].微生物学报,2010,50:1208-1217.

[34] 杜雪倩,张捷,张思雨,等.枸杞根际促生菌筛选及其促生效应[J].南方农业学报,2025: 1-14.

基金资助

“新农科”高原植物生产类专业提升实践创新能力平台建设(藏财预指2023-1号)

西藏自治区重点研发计划项目(XZ202201ZY0011N)

野生食药用菌资源保护与利用跨区域合作科技创新中心，编号(YDZJ202402013CXJD)