不同提取及扩增方法检测大肠杆菌DNA的性能比较

余小妹; 钱纯亘; 聂立波; 汤建新; 吴力强; 黄钊; 易辉

doi:10.13715/j.issn.2096-644X.20231106.0002

湘潭大学学报（自然科学版） ›› 2024, Vol. 46 ›› Issue (02) : 110 -122. DOI: 10.13715/j.issn.2096-644X.20231106.0002

不同提取及扩增方法检测大肠杆菌DNA的性能比较

余小妹, 钱纯亘, 聂立波, 汤建新, 吴力强, 黄钊, 易辉

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摘要

大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌，为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测，分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠（SDS）裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7基因组DNA,考察了环介导等温扩增（LAMP）和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）扩增法对所提取DNA的检测效果，并建立最佳的核酸快速提取样品预处理方法.结果表明，以碱加热裂解预处理提取的大肠杆菌O157∶H7基因组DNA为检测样本时，LAMP扩增及qPCR扩增法的检测性能最好，检出限达到10¹ CFU/mL,与常规商品化试剂盒提取所得菌液基因组DNA的检测性能一致.所建立的碱加热裂解样品预处理方法耗时短、成本低，无须进行复杂的核酸提取，操作简单，可用于大肠杆菌O157∶H7的快速检测.