独活寄生汤调控衣霉素诱导的内质网应激减缓人髓核细胞凋亡

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20240320.002

海南医学院学报 ›› 2024, Vol. 30 ›› Issue (12) : 913 -920+929. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20240320.002

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摘要

目的：研究独活寄生汤对衣霉素诱导的人髓核细胞内质网应激和细胞凋亡的作用及机制。方法：将30只10周龄的SD大鼠以独活寄生汤灌胃，连续灌胃14 d后经腹主动脉取血，获取含药血清。采用衣霉素和不同浓度独活寄生汤处理人髓核细胞，使用CCK-8检测髓核细胞的活力。将人髓核细胞随机分为5组：对照组（未经衣霉素和独活寄生汤含药血清处理），衣霉素组（加入10μg/mL衣霉素溶液），衣霉素+4-PBA组（加入10μg/mL衣霉素溶液和5 mmol/mL 4-PBA），衣霉素+独活寄生汤组（加入10μg/mL衣霉素溶液和10%独活寄生汤含药血清），衣霉素+生理盐水组（加入10μg/mL衣霉素溶液和等剂量生理盐水）。免疫荧光法检测各组CHOP、GRP78的表达水平；TUNEL法检测分析髓核细胞凋亡率；qRT-PCR法和Western Blot法分别检测各组CHOP、GRP78、内质网应激和凋亡相关通路mRNA和蛋白的表达。结果：独活寄生汤能够增强髓核细胞活力、降低髓核细胞凋亡率，对衣霉素可能存在拮抗作用。与对照组相比，衣霉素处理后髓核细胞中CHOP、GRP78、Cleaved-caspase3、Bax和PERK/elF2α、IREI/JNK和Caspase12等凋亡相关通路的蛋白和基因表达显著升高，BCL-2蛋白和基因表达显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）；而衣霉素+生理盐水组表达与衣霉素组相当，差异无统计学意义。与衣霉素组相比，衣霉素+独活寄生汤含药血清组中的CHOP、GRP78、Cleaved-caspase3、Bax和PERK/elF2α、IREI/JNK和Caspase12等凋亡相关通路的蛋白和基因表达出现明显下降，BCL-2蛋白和基因表达显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）；其调控效果与阳性对照衣霉素+4-PBA组相当，差异无统计学意义。结论：衣霉素能够诱导髓核细胞内质网应激，促使细胞凋亡增加；独活寄生汤对衣霉素诱导的内质网应激具有调控作用，抑制髓核细胞凋亡，从而延缓椎间盘退变。