核酸酶NucB高效表达工程菌株的构建及功能测定

摘要

目的 构建可以高效稳定表达核酸酶NucB的工程菌株。方法 以大肠杆菌DH5α(DE3)为材料，采用基因编辑的方法将其中的必需基因lexA敲除，重新设计一个带有lexA基因的质粒进行基因回补，从而得到工程菌株DH5α (DE3)ΔlexA，再将带有目的基因nucB的质粒转入基因改造后的菌株中发酵培养生产核酸酶NucB并测定功能。结果 经过基因改造后的大肠杆菌DH5α (DE3)ΔlexA与未经基因改造的大肠杆菌对比显示：改造后的菌株质粒非常稳定，蛋白表达量高且发酵过程中可以不用添加抗生素来生产核酸酶NucB。结论 以基因编辑的方法成功构建一株无抗生素、高效稳定表达核酸酶NucB的工程菌株DH5α (DE3)ΔlexA。

关键词

基因敲除 / 无抗生素 / 高效稳定 / 核酸酶NucB