PCR-HRM检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药性技术建立与评价

摘要

目的 建立聚合酶链式反应-高分辨率熔解（PCR-HRM）曲线分析检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因的方法，并评估其对克拉霉素耐药表型的检测价值。方法 于2017年9月—2018年12月从甘肃省5家医院接受胃镜检查的患者中随机采集245例胃黏膜组织样本。微需氧环境（5%O₂,10%CO₂,85%N₂）下分离培养幽门螺杆菌，成功获取116株临床分离株。采用E-试验检测菌株克拉霉素耐药表型；提取胃黏膜标本中幽门螺杆菌DNA，基于其23S rRNA基因序列设计特异性引物，开展PCR-HRM。比较PCR-HRM与E-试验检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药表型的一致性，并随机选取部分菌株目标区域的DNA扩增片段测序，验证PCR-HRM分析结果的准确性。结果 E-试验检测结果显示，克拉霉素的耐药率为60.34%。PCR-HRM分析正确鉴定了88.57%的耐药菌株和97.83%的敏感菌株，其检测克拉霉素耐药性的灵敏度、特异度和阴性似然比分别为87.14%、97.83%和0.131，阳性预测值和阴性预测值分别为98.39%和83.33%。PCRHRM与E-试验检测结果呈高度一致性（Kappa=0.825,P<0.001）。DNA测序表明，PCR-HRM对克拉霉素耐药表型的鉴定结果与基因分型结果完全一致。结论 PCR-HRM是一种快速、简便、准确、经济的幽门螺杆菌克拉霉素耐药表型检测方法，具有较高的临床应用价值。

关键词

聚合酶链式反应 / 高分辨率熔解曲线分析 / 幽门螺杆菌 / 抗生素耐药性 / 克拉霉素

基金资助

甘肃省自然科学基金资助项目(22JR5RA960); 甘肃省联合科研重大资助项目(23JRRA1501); 甘肃省科技重大专项资助项目(24ZDFA006)