P16调控PERK-eIF2α通路抑制结直肠癌的机制研究

摘要

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(P16)干预蛋白激酶RNA样内质网激酶-真核起始因子2α(PERK-eIF2α)通路，抑制结直肠癌恶性生物学行为的作用机制。方法 采用定量实时荧光聚合酶链式反应（qRTPCR）检测人正常结肠上皮细胞系NCM460与结直肠癌细胞系SW480中P16表达水平。通过慢病毒构建P16过表达SW480细胞，并经Western blotting验证过表达效率。采用平板克隆、Cell Counting Kit-8(CCK-8)、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验评估P16过表达对SW480细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。建立祼鼠SW480移植瘤模型，观察P16对肿瘤生长的影响；并通过免疫组织化学及Western blotting检测GRP78、CHOP、P16及细胞凋亡相关蛋白和PERK-eIF2α通路蛋白的表达。结果 人结直肠癌SW480细胞P16 mRNA水平表达低（P<0.05）。与野生型SW480细胞组比较，P16过表达组SW480细胞增殖、迁移及侵袭能力抑制，凋亡水平促进（P<0.05）；肿瘤质量与体积减小（P<0.05），内质网应激标志物GRP78、CHOP阳性率增大（P<0.05）,P16、Cleaved caspase-3、Bax、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达水平均升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 P16可能通过激活PERK-eIF2α通路诱导内质网应激，发挥抗肿瘤作用。

关键词

结直肠癌 / 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A / 内质网应激 / 恶性生物学行为 / 蛋白激酶RNA样内质网激酶-真核起始因子2α