胸腺基质淋巴细胞生成素在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠模型中的作用机制

Mechanism of action of thymic stromal lymphopoietin in a mouse model of acetaminophen-induced acute liver injury

摘要

目的 探讨胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在对乙酰氨基酚（APAP）诱导的急性肝损伤小鼠模型中的作用及其机制。 方法 16只野生型（WT）雄性C57BL/6J小鼠被随机分为2组，分别为control组和APAP组，每组8只；APAP组按照400 mg/kg的剂量腹腔注射APAP溶液建模，control组注射等体积生理盐水，6 h后进行取材。全自动化学分析仪检测血清ALT及AST，实时定量PCR方法检测肝组织炎症因子TNF-α和IL-6的mRNA表达，试剂盒检测肝组织匀浆中谷胱甘肽（GSH）含量，实时定量PCR、Western Blot方法检测TSLP的转录和蛋白水平的表达。另取22只WT雄性C57BL/6J小鼠，随机分为3组，分别为control组（n=8）、APAP组（n=8）和APAP+rTSLP组（n=6），APAP+rTSLP组先腹腔注射rTSLP溶液，同时control组、APAP组注射溶剂PBS；30 min后APAP+rTSLP组和APAP组注射APAP溶液，control组注射等体积生理盐水。检测3组小鼠血清ALT及AST；通过HE染色观察小鼠肝脏的病理变化；试剂盒检测肝组织匀浆中氧化应激指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；Western Blot方法检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62，以及核因子E2相关因子2（Nrf2）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化-Akt（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化-mTOR（p-mTOR）等分子的蛋白表达。此外，取16只WT雄性C57BL/6J小鼠和16只沉默TSLP受体（TSLPR^-/-）小鼠，分为WT小鼠control组、WT小鼠APAP组、TSLPR^-/-小鼠control组和TSLPR^-/-小鼠APAP组，每组8只，WT小鼠APAP组和TSLPR^-/-小鼠APAP组按照400 mg/kg的剂量腹腔注射APAP溶液建模，WT小鼠control组和TSLPR^-/-小鼠control组注射等体积生理盐水。检测4组小鼠血清ALT、AST以及肝组织的MDA含量；Western Blot方法检测LC3Ⅰ/Ⅱ、Akt、p-Akt的蛋白表达。计量资料两组间比较采用成组t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果 APAP诱导急性肝损伤小鼠建模成功后，肝脏TSLP的mRNA和蛋白表达水平较control组均升高（P值均<0.01）。在应用rTSLP的研究中，相比于control组，APAP组的ALT、AST明显升高（P值均<0.001），肝组织HE染色呈现沿中央静脉放射状坏死，氧化应激指标SOD、Nrf2蛋白表达下降，MDA水平上升（P值均<0.01）；而APAP+rTSLP组较APAP组，ALT、AST下降，肝组织坏死面积减小，SOD、Nrf2蛋白表达升高，MDA下降（P值均<0.05）；APAP+rTSLP组与control组相比，LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62、p-Akt、p-mTOR蛋白表达差异均有统计学意义（P值均<0.01）。在应用TSLPR^-/-小鼠的研究中，建模后，TSLPR^-/-小鼠相较于WT小鼠，ALT、AST、MDA升高，LC3Ⅰ/Ⅱ、p-Akt蛋白表达下降（P值均<0.01）。 结论 TSLP能够增加自噬，降低氧化应激，从而改善过量APAP引起的急性肝损伤，并且其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活和mTOR的抑制有关。

关键词

胸腺基质淋巴细胞生成素 / 醋氨酚 / 化学性与药物性肝损伤 / 小鼠， 近交C57BL

Key words

Thymic Stromal Lymphopoietin / Acetaminophen / Chemical and Drug Induced Liver Injury / Mice， Inbred C57BL