基于新标准WS/T406-2024的凝血分析仪性能验证

Performance verification of coagulation analyzer based on the new standard WS/T406-2024

摘要

目的 基于新标准WS/T406-2024建立凝血分析仪的性能验证方案。 方法 以新标准《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T406-2024）为基础，参照《CNAS-GL037临床化学定量检验程序性能验证指南》、《凝血分析仪》（YY/T 0659-2017）等行业标准，建立Werfen ACLTOP750 LAS凝血分析仪的性能验证方案，方案涵盖批内精密度、日间精密度、线性、正确度、实验室间结果的可比性、实验室内结果的可比性、参考区间、携带污染率、可报告范围、溶血、黄疸、脂血/浑浊（hemolysis，icterus，lipemia/turbidity，HIL）指数等；按照验证方案对凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）、凝血酶时间（thrombin time，TT）、D-二聚体（D-dimer，D-D））、纤维蛋白（原）降解产物［fibrin（ogen） degradation products，FDP］和抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ，AT-Ⅲ）共7个项目进行性能验证。 结果 批内精密度、日间精密度、正确度、实验室间结果的可比性、实验室内结果的可比性均满足要求。线性回归方程a值均在（1.00±0.05）范围内且相关系数R²均≥0.95，各浓度水平检测均值与理论值的偏差均＜10%，线性验证通过。男女2组健康成人所有项目结果均在参考区间范围内，参考区间验证通过。项目内及项目间携带污染率均≤10%。结合临床实践针对不同项目设置适宜稀释度，其中将D-D稀释度扩大至25倍，各项目各浓度检测值与理论值偏差均<10%，符合临床实践的可报告范围验证通过。仪器间HIL指数一致性通过，并与肉眼判断结果相符。 结论 本研究基于WS/T406-2024并结合临床实践建立了完善的凝血分析仪性能验证方案，方案结果全面准确地反映出仪器可用于临床检验的良好的的性能状态，也为检验同行提供参考。

Abstract

Objective To establish a performance verification protocol for coagulation analyzers based on the new standard WS/T406-2024. Methods We established performance verification protocol for the Werfen ACLTOP750 LAS coagulation analyzer based on the new standard Quality Standards for Analytical Performance of Routine Clinical Hematology Tests （WS/T 406-2024）， with reference to industry standards such as Guidance on Performance Verification of Quantitative Clinical Chemistry Testing Procedures （CNAS-GL037） and Coagulation Analyzers （YY/T0659-2017）. The protocol included the following parameters： the within-run precision， between-day precision， linearity， trueness， inter-laboratory comparability of results， intra-laboratory comparability of results， reference interval， carry-over rate， reportable range， and hemolysis， icterus， lipemia/turbidity （HIL） indexes. According to the verification protocol， performance verification was conducted on prothrombin time （PT）， activated partial thromboplastin time （APTT）， fibrinogen （FIB）， thrombin time （TT）， D-dimer （D-D）， fibrin（ogen） degradation products （FDP） and antithrombin Ⅲ （AT-Ⅲ）. Results The within-run precision， between-day precision， trueness， inter-laboratory comparability of results， and intra-laboratory comparability of results all met the required specifications. The slopes of the linear regression equations were all within the range of （1.00±0.05） and the correlation coefficients （R²） were all ≥ 0.95. The deviations between the measured mean values and the theoretical values at all concentration levels were less than 10%， thus verifying acceptable linearity. The results for all parameters fell within the established reference intervals for both male and female healthy adult groups， confirming the validity of the reference intervals. Both within-parameter and between-parameter carry-over rates were ≤10%. By establishing appropriate dilution factors for different parameters based on clinical practice， notably expanding the D-D dilution factor to 25-fold， the deviations between the measured values and the theoretical values at various concentrations for all parameters were < 10%， verifying an acceptable reportable range appropriate for clinical practice. The consistency of HIL indexes among instruments was verified and consistent with the visual judgment results. Conclusion This study establishs a comprehensive performance verification protocol for coagulation analyzer based on WS/T406-2024 and clinical practice. The results of the protocol comprehensively and accurately reflect the instrument's good performance， indicating that it is appropriate for clinical testing while also providing a reference for laboratory peers.

Graphical abstract

关键词

血液凝固 / WS/T406-2024 / 性能验证 doi：10.3969/j.issn.1007-3205.2026.06.011

Key words

blood coagulation / WS/T406-2024 / performance verification

凝血实验室提供全套临床检测项目，涵盖种类丰富的常规及专用凝血检测，并可为住院及门诊患者的出血性与血栓性疾病诊断、病情监测提供专业结果解读^［1］。《CNAS CL02：2023医学实验室质量和能力认可准则》^［2］规定：“实验室在引入方法前，应制定程序以验证能够适当运用该方法，确保能达到制造商或方法规定的性能要求”。2024年5月9日，中华人民共和国国家卫生健康委员会发布了《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T406-2024）^［3］，将准确度验证更改为实验室间结果的可比性验证；增加了纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）正确度验证的要求；增加了参考区间的验证要求；此外，提出对于血液检验常用检测项目，当产品说明书所标示性能验证指标的要求高于本标准规定时，应遵循说明书的要求等通用要求。本研究基于WS/T406-2024并结合《CNAS-GL037临床化学定量检验程序性能验证指南》^［4］、《凝血分析仪》（YY/T 0659-2017）^［5］和临床检验工作实践，建立了全自动凝血分析仪性能验证方案，使用此方案验证仪器的批内精密度、日间精密度、线性、正确度、实验室间结果的可比性、实验室内结果的可比性、携带污染率、参考区间、可报告范围、溶血、黄疸、脂血/浑浊（hemolysis，icterus，lipemia/turbidity，HIL）指数等指标，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

国家卫健委临检中心室间质评物及参照《血栓与止血检验常用项目的标本采集与处理》（WS/T 359-2024）^［6］文件采集的枸橼酸钠（109 mmol/L）抗凝新鲜静脉血标本，血液与枸橼酸钠抗凝剂的体积比应为9∶1。分离血浆时，将装有标本的带盖试管在推荐的离心条件下（18～24 ℃、2 000 g、离心时间≥10 min），以得到乏血小板血浆（血小板计数＜10×10⁹/L）。沃芬公司生产的校准物：货号0020003700（LOT：E0743942）、货号0020009910（LOT：B36481 ）。沃芬公司生产的质控物：货号0020003110（LOT：N0935306）、货号0020003210（LOT：N0935112）、货号0020004200（LOT：N0643218）、货号0020500200（LOT：B36253）、货号 0020009920（LOT：B36800）。

1.2 仪器与试剂

沃芬公司ACLTOP750 LAS凝血分析仪及配套试剂。检测项目：凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、FIB、凝血酶时间（thrombin time，TT）、D-二聚体（D-dimer，D-D）、纤维蛋白（原）降解产物［fibrin（ogen） degradation products，FDP］和抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ，AT-Ⅲ）。

1.3 方法

1.3.1 批内精密度

参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），对每个验证项目取3个浓度，包含正常样品、异常样品1、异常样品2，其中PT、APTT异常样品的水平大于参考区间中位值的2倍，FIB异常样品的浓度>6 g/L或<1.5 g/L，TT异常样品的水平超出参考区间范围，每支样品重复检测10次，计算变异系数。

1.3.2 日间精密度

参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），使用2个浓度水平，包含正常和异常水平的质控品，其中PT、APTT异常样品的水平大于参考区间中位值的1.5倍，FIB异常样品的浓度＞6 g/L，TT异常样品的水平超出参考区间范围，每天检测1次，连续检测20 d，计算20个点的变异系数。

1.3.3 线性

在给定的分析测量范围内，检验程序使其检测结果与样品分析物浓度直接成比例的能力。参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），选择1份浓度水平接近线性范围上限的高值血浆标本和1份浓度水平接近线性范围下限的低值血浆标本，采用倍比稀释方法配制6个浓度水平的样品，每个浓度水平的样品各检测3次。计算各浓度水平的检测均值，分别以检测均值和理论值作回归分析，计算回归方程和相关系数R²，同时，计算检测均值与理论值的相对偏差。

1.3.4 正确度

参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），进行正确度验证，使用配套校准物，检测10次，计算检测的均值与校准物定值的偏倚。

1.3.5 实验室间结果的可比性

实验室应通过实验室间比对监控检验方法的性能，包括参加适于检验和检验结果解释的室间质量评价计划。参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），使用室间质评物进行单次检测，计算每份样品检测结果与靶值的相对偏差，每个检测项目的相对偏差符合要求的比例应≥80%。

1.3.6 实验室内结果的可比性

以TOP750为基准仪器，TOP750 LAS为比对仪器，选20个新鲜标本分别测定，计算2台仪器的偏差和相关系数。要求80%及以上的标本偏差在允许误差范围内，相关系数r²≥0.95。

1.3.7 参考区间

当解释检验结果需要时，实验室应制定生物参考区间和临床决定限，并告知用户。本方案对已有参考区间进行验证，参照《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T 406-2024），按性别分2组，每组使用20份健康人标本进行验证。每组90%及以上的结果在参考区间内为验证通过。

1.3.8 携带污染率

需验证项目内及项目间携带污染，要求携带污染率≤10%，根据行业标准《凝血分析仪》（YY/T 0659-2017）进行验证，①高浓度样本对低浓度样本的污染：按照高浓度测定值/低浓度样本测定值＞2的要求选高、低浓度样本各1份，分别标注H、L，将H标本连续测定3次后立即将L标本连续测定3次，记录结果H1、H2、H3、L1、L2、L3，携带污染率CR1=|L1―L3|/（H3―L3）×100%。②TT对APTT的携带污染：选取FIB浓度在3~4 g/L的标本1份，连续测定APTT3次，记录结果J1、J2、J3，立即连续测定原血浆TT 3次，再测定原血浆APTT1次，记录J4，计算携带污染率CR2=（（J1+J2+J3）/3―J4）/（J1+J2+J3）×100%。

1.3.9 可报告范围

根据（CNAS）-GL037，验证FIB、D-D、FDP、AT的测量区间，使用原厂配套因子稀释液对3个高值待测样本进行稀释。根据临床检验实践，设置FIB、FDP、AT稀释梯度为0倍、2倍、3倍、4倍；D-D稀释梯度为0倍、15倍、20倍、25倍。每个样本重复测定3次。计算乘以稀释倍数后的还原浓度和与理论值的相对偏差。

1.3.10 HIL指数验证

HIL指数常在血清和血浆样本中进行检测，用以验证样本质量，尤其是因为样本颜色可能会影响凝血检测结果^［7-8］。方案通过对比操作人员目视检查结果、2台仪器HIL指数，评估了ACLTOP750 LAS及ACLTOP750识别HIL异常的能力。共采用20份溶血样本、10份黄疸样本、3份脂血样本，另额外检测了2份同时存在明显溶血与黄疸的混合异常样本。

1.4 统计学方法

应用Excel统计软件进行数据分析，计算精密度变异系数（%），正确度偏倚（%），可比性及可报告范围偏差（%），携带污染率（%），同时计算线性回归方程和相关系数、相对偏差。

2 结　　果

2.1 批内精密度

各项目各浓度样品批内变异系数均满足WS/T406-2024、《D-二聚体定量监测》（WS/T477-2015）^［9］及厂家设定的要求，见表1。

2.2 日间精密度

各项目各浓度水平日间变异系数均满足WS/T406-2024、《D-二聚体定量监测》（WS/T477-2015）及厂家设定的要求，见表2。

2.3 线性验证

各项目均符合a值在1.00±0.05范围内，相关系数R² ≥0.95，各浓度水平检测均值与理论值的相对偏差均＜10%的要求，通过验证，FIB、D-D、FDP、AT-Ⅲ的线性方程及线性图见图1~4，验证结果见表3。

2.4 正确度

各项目正确度偏倚均符合WS/T406-2024及厂家设定的要求，见表4。

2.5 实验室间结果的可比性

PT、INR 、APTT、FIB、TT 5个水平及D-D、FDP各2个水平的国家卫健临检中心室间质评物检测值与靶值的相对偏差的范围均小于允许总误差，即所有项目100%通过，见表5。另外，AT-Ⅲ>40%时，允许范围为靶值±20%，验证结果相对偏差为―1.49%，AT-Ⅲ<40%时，允许范围为靶值±8，靶值为29.1%，本研究结果为28.5%，通过验证。

2.6 实验室内结果的可比性

所有项目>80%的标本相对偏差在允许误差范围内，相关系数r²均≥0.95，通过验证，见表6。

2.7 参考区间

各项目按性别分组，每组各20个结果全部在参考区间内，通过验证，见表7。

2.8 携带污染

高水平对低水平的污染率CR1均≤10%，满足要求，见表8。同一样本TT项目对APTT项目的污染率CR2为0.55%，通过验证。

2.9 可报告范围

FIB、FDP、AT-Ⅲ各稀释浓度测定值与理论值相对偏差均<10%，符合要求，见表9。D-D按照0倍、15倍、20倍、25倍梯度稀释，各稀释浓度相对偏差均<10%，通过验证。

2.10 HIL指数

通过ACLTOP750 LAS及ACLTOP750检测得到的HIL指标整体具有一致性，所有检测指标结果与人工肉眼观察结果总体一致。

3 讨　　论

血液凝固是指凝血因子与血小板相互作用形成不溶性纤维蛋白凝块的过程^［10］。凝血功能是机体维持血管壁完整性并预防出血的基本生理功能^［11］。凝血功能中，PT和APTT揭示外源性与内源性凝血途径^［12］；FIB、D-D及FDP检测可提高患者高凝状态及纤溶亢进的诊断效能^［13-15］；抗凝血酶的活性检测可用于易栓症筛查^［16］。国际血液学标准化委员会（International Council for Standardization in Haematology，ICSH）指南建议临床实验室基于使用的凝血分析仪对出凝血检验项目进行性能验证^［17-18］。国家标准GB/T 22576.1—2018《医学实验室——质量和能力的要求第一部分：通用要求》^［19］明确指出“实验室应在设备安装和使用前验证其能够达到必要的性能，并符合相关检验的要求”。目前，国内外文献缺乏建立完善的凝血分析仪性能验证方案的报道。

临床实验室制订仪器性能验证方案，必须以现行的行业标准文件为核心依据并严格遵照执行；中华人民共和国国家卫生健康委员会于2024年5月9日发布、2024年11月1日实施的《临床血液学检验常规项目分析质量标准》（WS/T406-2024），是目前最新的可适用于全自动凝血分析仪性能验证的规范性文件。为满足WS/T406-2024标准的要求，在认真贯彻学习标准的基础上，结合《CNAS-GL037临床化学定量检验程序性能验证指南》《凝血分析仪》（YY/T 0659-2017）等行业标准和临床检验实践，补充纳入了携带污染率、可报告范围两个性能指标，弥补了WS/T406-2024文件中以上两个指标的缺失，本实验室建立了较完善的全自动凝血分析仪性能验证方案，同时在实际应用中对该方案进行细化优化与完善。

D-D检测目前已成为临床最常使用的血栓与止血检验项目之一，在静脉血栓栓塞、急性主动脉夹层的排除诊断、弥散性血管内凝血的诊断及新型冠状病毒感染凝血病中具有重要的临床应用价值^［20-22］，并且D-D水平可能与预后正相关，而且预后不良患者的D-D值在一段时间后仍然保持高浓度水平^［23-24］。对于D-D高值标本，沃芬ACLTOP750 LAS设有高值模式，触发规则后会自动运行高值模式，但线性验证只验证了正常模式即厂家说明书标注的线性范围。如果完全按照WS/T406-2024文件执行，因标准未涵盖可报告范围性能指标的验证，则无法覆盖高值样本稀释后检验结果的性能验证；文献报道《罗氏t711血凝仪凝血七项检测的性能验证》^［25］按照《CNAS-GL037临床化学定量检验程序性能验证指南》将D-D最大稀释倍数设定为8倍验证可报告范围；本方案将D-D最大稀释倍数扩大至25倍进行验证，更好地满足了临床诊疗需求，且与之相比明确了精密度选取标本浓度，增加了实验室内可比性验证，项目间携带污染验证，HIL指数验证，进一步完善了性能验证方案，也为检验同行提供参考。

使用此方案对本实验室即将投入使用的ACLTOP750 LAS全自动凝血分析仪进行验证，结果显示各项验证参数均符合相关评价标准，通过验证，该仪器可用于临床检测标本。另外，临床检验实践证实，该评价方案具备指标全面、可操作性突出的特点，可对凝血分析仪的性能进行全方位评估，不仅为临床凝血实验室的检测质量提供了可靠保障，也为国内该领域规范化标准文件的制定提供了有力的实践依据。

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基金资助

国家科技重大专项(2023ZD0509500)