CSDC2蛋白免疫优势肽段分析及其多克隆抗体的制备

摘要

目的 为制备含有C2的冷休克结构域(cold shock domain containing C2, CSDC2)的特异性抗体，本试验预测了CSDC2蛋白的免疫优势肽段并制备多克隆抗体，可为进一步探究其功能奠定基础。方法 本研究以绒山羊CSDC2蛋白全长氨基酸序列为基础，应用在线分析工具Expasy分析亲疏水性；SOPMA和Predictprotein共同分析二级结构；DNAstar分析抗原指数、表面可及性、柔韧性；TMHHM 2.0预测跨膜结构；SWISS-MODEL预测三级结构；SignalP 5.0预测信号肽；NetPhos 3.1预测磷酸化位点；SVMTriP在线分析软件预测抗原表位，综上分析获得CSDC2免疫优势肽段，制备多克隆抗体；ELISA检测多克隆抗体效价，Western blot验证抗体特异性。结果 CSDC2为不稳定亲水蛋白，无跨膜结构和信号肽区域，具有22个磷酸化位点，二级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋和延伸链构成。最终选取绒山羊CSDC2蛋白N-端15-33氨基酸序列(HSPKSPVWPTFPFHREGSR)为特异免疫肽段，诱导兔产生CSDC2蛋白特异性IgG抗体，Western blot结果表明该抗体可以与绒山羊CSDC2蛋白进行特异性结合。结论 本研究得出绒山羊CSDC2的免疫优势肽段为15～33 aa(HSPKSPVWPTFPFHREGSR)并免疫试验兔制备了多克隆抗体，进一步实验证明该抗体具有较好生物学效价，为后续深入研究CSDC2在绒山羊绒毛周期性生长调控的作用奠定了理论基础。

关键词

绒山羊 / CSDC2 / 生物信息学分析 / 毛囊周期性生长 / 多克隆抗体

基金资助

国家自然基金项目(31802045); 石河子大学青年创新拔尖人才项目(CXBJ201903)