泛素E3连接酶CHIP介导RCC2的泛素化及降解

摘要

目的 本课题组前期构建了一种正交泛素传递方法，并发现染色体浓缩调节蛋白2(RCC2)是泛素连接酶CHIP的潜在底物。本实验旨在验证CHIP是否能介导RCC2的泛素化及降解，以期通过CHIP来泛素化调控RCC2的表达和功能。方法 首先构建CHIP及其突变体质粒，验证CHIP与RCC2是否有相互作用；然后构建pLVX-RCC2-FLAG重组质粒并转染进CHIP敲减细胞株(shCHIP)、HEK293细胞株、CHIP过表达细胞株(OE CHIP),通过免疫共沉淀下拉富集RCC2-FLAG并检测其泛素化水平；接下来在HEK293细胞中转染不同量的CHIP,以及设置CHX chase蛋白稳定性实验，检测RCC2的蛋白水平变化；最后利用泛素突变体K48R-Ub及K11R-Ub进行CHIP介导RCC2上形成泛素链的实验检测。结果 在HEK293细胞中，CHIP能够介导RCC2的泛素化，并在RCC2上形成K48和K11多聚泛素链，促进其通过蛋白酶体发生降解。结论 泛素连接酶CHIP能够介导RCC2的泛素化及降解，为实现通过CHIP来泛素化调控RCC2提供了理论基础。

关键词

泛素化 / 泛素连接酶CHIP / 染色体浓缩调节蛋白2 / 降解