驴Zfy基因干扰载体的构建及验证

李梦雨; 孙玉江; 李超程; 吕毅航; 范洪先; 郑新宝; 肖海霞; 贾斌

doi:10.13880/j.cnki.65-1174/n.2023.22.033

石河子大学学报（自然科学版） ›› 2023, Vol. 41 ›› Issue (04) : 435 -440. DOI: 10.13880/j.cnki.65-1174/n.2023.22.033

驴Zfy基因干扰载体的构建及验证

李梦雨, 孙玉江, 李超程, 吕毅航, 范洪先, 郑新宝, 肖海霞, 贾斌

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摘要

目的探讨干扰驴Zfy基因的体内外干扰效果。方法根据驴Zfy基因设计合成4段shRNA,并由独立的U6启动子启动，每两个shRNA片段串联组合成干扰载体，体外培养生精细胞检测干扰载体的干扰效率，筛选最佳的干扰载体用于体内验证干扰效果。结果结果显示：构建出2个驴Zfy基因双shRNA串联重组干扰载体CV250-1、CV250-2,细胞水平验证结果表明CV250-1的干扰效率为76.37%±6.36%,差异极显著(P<0.01);CV250-2的干扰效率为67.73%±4.94%,差异显著(P<0.05)。成功对CV250-1重组载体进行体内验证，经母体静脉血胎儿游离DNA性别鉴定得到胎儿雌性率为71.05%(P<0.05)。结论成功构建的驴Zfy基因重组载体CV250-1,可抑制种公驴睾丸组织Zfy基因的表达，细胞水平干扰效率为76.37%,体内试验胎儿雌性率为71.05%,差异显著(P<0.05)。