miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的 SH-SY5Y神经细胞凋亡

摘要

目的 皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一，基于前期深度测序技术，我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能，明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法 采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型，脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性，双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤，检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果 大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3′-UTR区，且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现，相对于Bcl-2 3′UTR-WT与mimic-NC共转染组，Bcl-2 3′UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组，荧光活性无显著差异(P>0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞，miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P<0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P<0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P<0.001)。结论 miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

关键词

miR-181a / Bcl-2 / SH-SY5Y / OGD/R / 凋亡