基于CRISPR/Cas9技术的SS18-SSX1阳性细胞模型的构建与验证

田娇; 张乾儒; 王宁; 史奇; 李亚; 张琨岚; 李锋

doi:10.13880/j.cnki.65-1174/n.2024.22.035

石河子大学学报（自然科学版） ›› 2025, Vol. 43 ›› Issue (01) : 8 -15. DOI: 10.13880/j.cnki.65-1174/n.2024.22.035

基于CRISPR/Cas9技术的SS18-SSX1阳性细胞模型的构建与验证

田娇, 张乾儒, 王宁, 史奇, 李亚, 张琨岚, 李锋

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摘要

目的利用CRISPR/Cas9技术构建并验证SS18-SSX1⁺-HEK293T细胞模型。方法靶向SS18和SSX1分别设计sgRNA,构建Lentivirus-CRISPR v2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP一体化慢病毒载体,通过慢病毒转染和荧光流式分选技术筛选转入载体的HEK293T多克隆细胞,在多克隆细胞的基础上挑选SS18-SSX1阳性的单克隆细胞株,通过RT-PCR、Sanger测序和Western Blot验证SS18-SSX1⁺-HEK293T单克隆细胞系构建成功。结果成功构建了Lentivirus-CRISPR v2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP慢病毒载体;通过RT-PCR、Sanger测序和WB实验在178个HEK293T单克隆细胞中成功筛选并验证出1株SS18-SSX1阳性的单克隆细胞系。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建SS18-SSX1融合基因阳性的HEK293T细胞系。