基于TIDE和TIDER的绵羊囊胚基因组编辑效率分析方法的研究

摘要

目的 验证TIDE(Track of Indels by Decomposition)和TIDER(Tracking of Insertion, DEletions and Recombination events)分析绵羊囊胚基因组编辑结果的可靠性，为检测基因组编辑绵羊胚胎突变效率提供精准、及时的分析方法。方法 TIDE是1种简便精准的检测方法，能精确测定CRISPR/Cas9在细胞群体中引发的靶向突变谱型和频率。利用TIDE平台对绵羊囊胚的基因组诱导突变进行表征分析与量化。结果 以MSTN基因突变绵羊的基因组样本为材料，进行PCR扩增并构建T载体，随机选取单克隆测序。测序结果证实了TIDE分析基因组编辑结果的准确性。通过将TIDER分析单链寡核苷酸模板整合产生的编辑结果与DNA限制性酶切图谱对比，验证了TIDER分析外源DNA短片段导入的准确性。结论 TIDE和TIDER工具可有效量化绵羊囊胚突变率，识别主要的插入和缺失类型，是高效经济的基因突变分析方法 。

关键词

Cas9核糖核蛋白复合物 / TIDE分析 / TIDER分析 / 囊胚 / 绵羊