KLF4通过抑制脂肪酸合成抑制MASLD的发生

摘要

目的 研究KLF4在代谢功能障碍相关脂肪变性肝病(Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease, MASLD)发生过程中的作用，并初步探究其可能的分子机制。方法 将12只C57BL/6雄性小鼠分为普通饮食组(Normal Chow Diet, ND,n=6)和高脂饮食组(High Fat Diet, HFD,n=6),监测其生理指标变化，分析肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平。使用游离脂肪酸(Free fatty acids, FFA)处理人肝癌细胞HepG2和小鼠肝癌细胞Hepa1-6构建脂代谢紊乱细胞模型。体外细胞实验分为过表达KLF4并用游离脂肪酸处理组(OE-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),敲低KLF4并用游离脂肪酸处理组(Si-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),通过酶法检测细胞内甘油三酯(Triglyceride, TG)和胆固醇(Cholesterol, CHO)水平；实时荧光定量聚合酶链反应检测KLF4以及脂质合成相关因子脂肪酸合酶(Fatty acid synthase, FASN)、甾醇调节元件结合蛋白1(Sterol-regulatory element binding proteins, SREBP1)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ)的mRNA表达水平；蛋白质免疫印记法检测KLF4以及脂质合成相关因子FASN、SREBP1和PPARγ的蛋白表达水平；油红O染色观察细胞内脂滴积累情况。结果 HFD组小鼠肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平显著低于ND组，FASN、SREBP1和PPARγ的mRNA表达水平显著高于ND组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);HepG2细胞和Hepa1-6细胞FFA处理组KLF4的mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05,P<0.01);HepG2细胞和Hepa1-6细胞中过表达KLF4改善脂质积累，降低脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与之相反，HepG2细胞和Hepa1-6细胞中敲低KLF4加剧脂质积累，增加脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论 KLF4通过负调控脂肪酸的合成抑制MASLD的发生。

关键词

KLF4 / 代谢功能障碍相关脂肪变性肝病 / 转录因子 / 脂质合成