miR-129-5p靶向HMGB1减轻大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的炎症和脑组织损伤

摘要

目的 通过前期课题组测序基础，筛选MCAO大鼠皮层组织中变化较显著的miR-129-5p及其可能的靶基因(high-mobility group box 1, HMGB1),探究二者靶向调控关系，明确miR-129-5p—HMGB1调控网络在缺血性卒中对炎症水平影响及脑损伤的作用。方法 线栓法构建大鼠中动脉闭塞模型，通过行为学评分、全脑TTC染色及炎症相关因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)指标评定缺血再灌注模型，应用qRT-PCR及Western Blot验证miR-129-5p与HMGB1的表达相关性。预测miR-129-5p与HMGB1的结合位点并比对相关物种保守性，双荧光素酶报告实验验证二者结合位点特异性。利用侧脑室注射过表达miR-129-5p agomir,在体水平验证miR-129-5p对HMGB1表达的负向调控及对MCAO大鼠脑组织炎症水平和梗死的影响。结果 TTC染色显示MCAO组大鼠梗死面积大于sham组大鼠(P<0.001),longa评分显示MCAO组大鼠有明显神经行为缺损(P<0.05)。炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.001),表明大鼠MCAO模型构建成功。大鼠脑缺血再灌注损伤后，miR-129-5p表达降低(P<0.001)、HMGB1表达升高(P<0.001),二者表达呈相反趋势。利用RNA hybrid生信软件分析预测miR-129-5p可靶向结合HMGB1的3′UTR区，且结合区域在大鼠、人、猪等物种间高度保守。通过双荧光素酶报告实验发现miR-129-5p agomir与HMGB1 3′UTR-WT共转染相较于HMGB1 3′UTR-野生型与agomir-NC共转染组荧光活性更高(P<0.001)。MCAO模型大鼠大脑过表达miR-129-5p显著下调HMGB1的表达(P<0.001),显著抑制炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的上调(P<0.001),梗死面积显著缩小(P<0.001)。结论 miR-129-5p通过靶向HMGB1来参与其转录后的负向调控，过表达miR-129-5p可下调HMGB1的表达从而抑制脑缺血再灌注损伤诱导的炎症，减轻脑损伤程度。

关键词

miR-129-5p / HMGB1 / MCAO / 炎症