细粒棘球蚴原头蚴在体内外对小鼠肝癌影响的初步研究

摘要

目的 基于体外、体内实验探讨细粒棘球蚴原头蚴对小鼠肝癌Hepa1-6细胞直接和间接作用。方法 在体外实验中，使用不同数量单位的原头蚴干预肝癌细胞，采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况，Western-Blotting检测肝癌细胞Bax、Bcl-2、Casepase-3凋亡蛋白表达水平，通过划痕实验和Transwell实验观察肝癌细胞的迁移和侵袭能力。体内实验将小鼠随机分为Control组、CE组、Hepa1-6组和CE+Hepa1-6组。CE组及CE+Hepa1-6组小鼠于肝叶上接种原头蚴，30 d后Hepa1-6组于小鼠肝叶上注射Hepa1-6肿瘤细胞，CE+Hepa1-6组于包虫囊肿所在肝叶上注射Hepa1-6肿瘤细胞。20 d后处死小鼠，使用ELISA法检测血浆AFP水平，HE染色观察病理学变化，免疫组化分析CD4及CD8免疫细胞的分布情况。结果 体外研究结果显示，CCK-8结果示48 h后1 500个·mL^-1组增殖能力显著高于空白组（P<0.01）,72 h后1 000、1 500个·mL^-1组增殖能力显著高于空白组（P<0.01）,96 h后各干预组增殖能力均显著高于空白组（P<0.01）。Western-Blotting分析结果显示，1 000个·mL^-1、1 500个·mL^-1组的Bax/Bcl-2相对表达量和casepase-3的表达量均低于空白组（P<0.05）。划痕实验和Transwell实验示1 000、1 500个·mL^-1组迁移能力和侵袭能力均显著高于空白组（P<0.01）。体内研究结果显示，CE+Hepa1-6组小鼠成瘤率显著低于Hepa1-6组成瘤率（P<0.01）,ELISA法测得CE+Hepa1-6组的AFP表达量显著低于Hepa1-6组（P<0.01）。免疫组化分析结果显示，CD8主要分布在CE+Hepa1-6组和Hepa1-6组瘤实质内，少量分布在瘤周，CE+Hepa1-6组瘤组织CD8表达显著高于Hepa1-6组（P<0.01）。CD4主要分布在CE+Hepa1-6组瘤实质内，而在Hepa1-6组瘤内及瘤周表达极少，CE+Hepa1-6组瘤组织CD4表达显著高于Hepa1-6组（P<0.01）,CE+Hepa1-6组CD4/CD8比值高于Hepa1-6组（P<0.01）。结论 原头蚴能在体外促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，同时抑制其凋亡；在体内能显著抑制瘤体形成，且CD4和CD8阳性的相关免疫细胞参与了此过程。

关键词

细粒棘球蚴 / 肝癌 / 增殖 / 凋亡 / 迁移 / 侵袭