蟾毒灵逆转TGF-β介导的巨噬细胞M2型极化并抑制肝星状细胞增殖和活化

摘要

目的 探讨蟾毒灵（Bufalin）对转化生长因子β（Transforming growth factor-β,TGF-β）介导的巨噬细胞极化表型转换的调控作用及其对巨噬细胞-肝星状细胞（Hepatic stellate cells, HSCs）交互的影响。方法 采用佛波酯(PMA,50 ng·mL^-1)将人单核细胞白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）诱导分化为M0型巨噬细胞后，随机分为5组：1)空白对照组；2)TGF-β单处理组(10 ng·mL^-1);3～5.TGF-β+低、中、高剂量蟾毒灵处理组(4、8、16 nmol·L^-1)。通过CCK-8法检测THP-1细胞活性；western blot和qRT-PCR分析M1/M2极化标志物（CD86、IL-1β、iNOS;CD206、IL-10、Arg-1）的表达变化。收集各组巨噬细胞上清，并将其作为条件培养基（CM）与人肝星状细胞（LX-2）共培养24 h,进一步通过western blot、qRT-PCR、EdU和CCK-8实验评估LX-2细胞活化标志物（α-SMA、COL1A1）及增殖情况。结果 TGF-β显著诱导巨噬细胞向M2表型极化（CD206、IL-10、Arg-1表达上调，CD86、IL-1β、iNOS表达下调，P<0.05）,而蟾毒灵能够逆转此效应（P<0.05）。此外，TGF-β组巨噬细胞CM显著促进LX-2细胞活化和增殖（P<0.05）,而蟾毒灵处理组CM可抑制上述效应（P<0.05）。结论 蟾毒灵能够逆转TGF-β诱导的M2型巨噬细胞极化并抑制其介导的肝星状细胞增殖和活化。

关键词

肝纤维化 / 蟾毒灵 / 巨噬细胞 / 肝星状细胞