CCL23通过CCR1/AKT信号轴抑制肝细胞癌生长及转移

摘要

目的 利用动物模型阐明CCL23对肝细胞癌恶性进展的影响及作用机制，验证靶向CCL23/CCR1/AKT信号轴的治疗潜力。方法 通过qRT-PCR筛选出本底低表达CCL23的肝细胞癌细胞系，构建慢病毒介导的CCL23过表达细胞株。采用CCK-8增殖检测、平板克隆实验、Transwell实验及EdU实验验证CCL23过表达对肝细胞癌细胞恶性表型的影响。通过BALB/c nu/nu小鼠皮下移植瘤模型（慢病毒/AAV双重验证）、尾静脉肺转移模型及免疫健全鼠模型，评估过表达CCL23对肿瘤生长与转移的影响。利用蛋白免疫印记技术解析AKT通路活化、转移相关蛋白及CD8蛋白的表达情况。使用CCR1的拮抗剂BX471进行阻断，确认CCL23/CCR1/AKT通路的生物学功能依赖性。结果 1)筛选出具有CCL23本底低表达的肝细胞癌细胞系MHCC97H,成功构建慢病毒介导的CCL23过表达细胞株。2)体外实验结果证明，与对照组相比，CCL23过表达组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均降低。3)慢病毒及AAV介导的CCL23过表达均显著抑制BALB/c nu/nu小鼠皮下肿瘤生长，且肿瘤组织中Ki-67、p-Akt及PCNA蛋白表达水平均显著降低。4)尾静脉注射肺转移模型中，CCL23过表达组肺转移灶数量及面积显著减少，且E-cadherin表达上调、N-cadherin及p-Akt表达水平下调。5)在免疫健全小鼠模型中，CCL23过表达同样可抑制皮下瘤生长，且CD8蛋白表达增加。结论 CCL23通过CCR1/AKT信号轴抑制肝细胞癌生长和肺转移并增强CD8⁺T细胞浸润。CCL23/CCR1/AKT信号轴是肝细胞癌的潜在治疗靶点。

关键词

肝细胞癌 / CCL23 / 恶性生物学表型 / AKT信号通路 / 肿瘤免疫微环境