SH3BGRL调控自噬影响宫颈癌细胞增殖和迁移的分子机制研究

摘要

目的 本研究旨在探讨SH3BGRL通过EGFR-mTOR-ULK1通路调控细胞自噬影响宫颈癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法 选取感染HPV16的宫颈癌SiHa细胞系和HPV18感染的HeLa细胞系，构建SH3BGRL过表达与敲低的宫颈癌细胞模型，运用蛋白质免疫印迹实验(Western blot)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、MTT实验、细胞集落形成实验、细胞划痕愈合实验、生物信息学和荧光染料单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine, MDC)分析方法进行研究。结果 使用qRT-PCR和Western blot实验发现SH3BGRL过表达与敲低的宫颈癌细胞模型构建成功；过表达SH3BGRL基因后，宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖和迁移显著降低，差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.001,P<0.000 1),敲低SH3BGRL基因后，宫颈癌细胞增殖和迁移能力显著增强，差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.000 1);研究发现SH3BGRL与EGFR直接结合并且能够影响EGFR的表达水平，Western blot实验发现过表达SH3BGRL基因后，EGFR、mTOR和P62蛋白质表达水平明显降低，ULK1和LC3表达水平明显增高；敲低SH3BGRL基因后，EGFR、mTOR和P62蛋白质表达水平明显增高，ULK1和LC3表达水平明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.000 1)。MDC实验发现过表达SH3BGRL基因后，SiHa和HeLa细胞的荧光与对照组比较明显增强，敲低SH3BGRL基因后，SiHa和HeLa细胞的荧光与对照组比较明显减弱，差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.001,P<0.000 1),表明SH3BGRL基因可以影响细胞自噬。结论 SH3BGRL基因能够通过EGFR-mTOR-ULK1途径增加宫颈癌细胞自噬水平，从而抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移。

关键词

宫颈癌 / SH3BGRL基因 / EGFR-mTOR-ULK1通路 / 细胞自噬