双酚A对子宫内膜间充质干/基质细胞干性的影响及人脐带间充质干细胞源性上清对细胞损伤的改善作用

摘要

目的：探讨双酚A （BPA）对子宫内膜间充质干/基质细胞（eMSCs）增殖活性和干性特征的影响，阐明人脐带间充质干细胞源性上清（hUCMSC-Sup）对细胞损伤的改善作用。方法：体外培养eMSCs，以0、200、250、300、350、400μmol·L^-1 BPA处理。将eMSCs分为对照组（仅培养液培养）、BPA组(含200μmol·L^-1 BPA的等体积培养液培养)、 BPA+hUCMSC-Sup组(含200μmol·L^-1 BPA及50%体积比hUCMSC-Sup的等体积培养液培养)和BPA+CHIR-99021组(含200μmol·L^-1 BPA及10μmol·L^-1 CHIR-99021的等体积培养液培养)，使用干细胞成球培养液培养eMSCs干细胞球，其余细胞均使用DMEM/F12完全培养基培养。噻唑蓝（MTT）法检测各组eMSCs存活率，球体形成实验检测各组eMSCs干细胞球数和直径，CCK-8法检测各组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性，流式细胞术检测各组eMSCs中CD73+细胞百分率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组eMSCs中性别决定区Y框蛋白2（Sox2）、八聚体结合转录因子4 （Oct4）和Nanog mRNA表达水平，Western blotting法检测各组eMSCs中β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达水平。结果：MTT法检测，BPA作用24和48 h，与0μmol·L^-1 BPA组比较，200、250、300、350和400μmol·L^-1 BPA组eMSCs存活率均明显降低（P<0.01）。药物作用24 h时，与对照组比较，BPA组eMSCs存活率明显降低（P<0.01）；药物作用48 h时，与对照组比较，BPA组eMSCs存活率明显降低（P<0.01）；与BPA组比较，BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs存活率明显升高（P<0.05）。球体形成实验检测，与培养3 d组比较，培养4和5 d组eMSCs干细胞球数和直径均明显增加（P<0.05或P<0.01）；与对照组比较，培养48 h时BPA组eMSCs干细胞球数和直径均明显减少（P<0.05或P<0.01）。CCK-8法检测，处理24和48 h时，与对照组比较，BPA组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性均明显降低（P<0.01）；与BPA组比较，BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性均明显升高（P<0.01）。流式细胞术检测，与对照组比较，BPA组eMSCs中CD73+细胞百分率明显降低（P<0.01）；与BPA组比较，BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs中CD73+细胞百分率明显升高（P<0.01）。RT-qPCR法检测，与对照组比较，BPA组eMSCs中Sox2、Oct4和Nanog mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）；与BPA组比较，BPA+hUCMSC-Sup组和BPA+CHIR-99021组eMSCs中Sox2、Oct4及Nanog mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组比较，BPA组eMSCs中β-catenin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；与BPA组比较，BPA+hUCMSC-Sup组和BPA+CHIR-99021组eMSCs中β-catenin蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。结论：BPA能够抑制eMSCs的干性特征，损伤子宫内膜的自我更新及修复作用，其机制可能与下调细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性有关。hUCMSC-Sup可以促进受损eMSCs的增殖，并对BPA诱导的eMSCs干性损伤起到改善作用。

关键词

双酚A / 子宫内膜间充质干/基质细胞 / 人脐带间充质干细胞 / 干细胞球