miR-200a通过靶向CDC45调节绒山羊皮肤色素沉着

摘要

为了揭示miR-200a是否通过靶向调控CDC45基因来影响辽宁绒山羊黑色素生成的生物学过程，选取黑、白色辽宁绒山羊采集背部皮肤组织，同时利用已保存的HEK293T细胞（人胚肾细胞）与B16细胞（黑色素瘤细胞）作为体外研究模型。首先通过运用miR数据库挖掘，预测到CDC45基因的3'UTR存在一个高度保守的miR-200a特异性结合位点；为验证二者之间的相互作用，在HEK293T细胞中构建了双荧光素酶报告基因系统进行验证；然后采用免疫荧光技术，对各组B16细胞内CDC45基因表达的特定分子（蛋白质、抗原等）进行精确定位与可视化表达分析；同时通过克隆形成试验，评估各组B16细胞的增殖潜能。最后借助qRT-PCR及Western blot等技术，全面评估CDC45基因在羊皮组织及B16细胞中的表达水平。结果表明，miR-200a的过表达在转录后（mRNA）及翻译后（蛋白质）水平均显著抑制了CDC45的活性，而针对该结合位点的突变处理则完全消除了这一抑制效应；在B16细胞模型中，miR-200a诱导的CDC45表达下调与黑色素细胞增殖能力的显著减弱呈现出紧密关联。从分子机制层面深入分析，结果发现，通过miR-200a-mimic转染来降低CDC45表达的效果，与miR-200a直接过表达所产生的影响高度一致，表明miR-200a与CDC45之间存在明确的功能性联系。综上，该研究结果证实了miR-200a能够特异性靶向调控CDC45基因。

关键词

miR-200a / CDC45 / 黑色素生成 / 免疫荧光技术 / Western blot / 皮肤色素沉着 / B16